1、原理： 

（1）計(jì)算細(xì)胞數(shù)目可用血球計(jì)數(shù)盤或是Coultercounter粒子計(jì)數(shù)器自動(dòng)計(jì)數(shù)。 
（2）血球計(jì)數(shù)盤一般有二個(gè)chambers，每個(gè)chamber中細(xì)刻9個(gè)1mm2大正方形，其中4個(gè)角落之正方形再細(xì)刻16個(gè)小格，深度均為0.1mm。當(dāng)chamber上方蓋上蓋玻片后，每個(gè)大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時(shí)，計(jì)數(shù)每個(gè)大正方形內(nèi)之細(xì)胞數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，再乘以104，即為每ml中之細(xì)胞數(shù)目。 
（3）存活測(cè)試之步驟為dyeexclusion，利用染料會(huì)滲入死細(xì)胞中而呈色，而活細(xì)胞因細(xì)胞膜完整，染料無法滲入而不會(huì)呈色。一般使用藍(lán)色之trypan blue染料，如果細(xì)胞不易吸收trypan blue，則用紅色之Erythrosin bluish。 

2、材料： 

0.4%w/v trypan blue（GibcoBRL15250-061）；Erythosin bluish stain；取0.1gram Erythrosin bluish（SigmaE-9259）及0.05gram preservative methyl paraben（SigmaH-3647）溶于100mlCa++/Mg++freesaline；血球計(jì)數(shù)盤及蓋玻片（Hemocytometerandcoverslip）；計(jì)數(shù)器（counter）；低倍倒立顯微鏡；粒子計(jì)數(shù)器（Coultercounter,CoulterElectronics）。

3、步驟： 

（1）取50μl細(xì)胞懸浮液與50μl trypan blue（orErythrosinbluish）等體積混合均勻于1.5ml小離心管中。
（2）取少許混合液（約15μl）自血球計(jì)數(shù)盤chamber上方凹槽加入，蓋上蓋玻片，于100倍倒立顯微鏡下觀察，活細(xì)胞不染色，死細(xì)胞則為藍(lán)色（或紅色-Erythrosin bluish）。 
（3）計(jì)數(shù)四個(gè)大方格之細(xì)胞總數(shù)，再除4，乘以稀釋倍數(shù)（至少乘以2，因與trypanblue等體積混合），zui后乘以104，即為每ml中細(xì)胞懸浮液之細(xì)胞數(shù)。若細(xì)胞位于線上，只計(jì)上線與右線之細(xì)胞（或計(jì)下線與左線之細(xì)胞）。 

注：4大格細(xì)胞總數(shù)×稀釋倍數(shù)×104/4=細(xì)胞數(shù)/ml；每一大格的體積=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml 

4、范例： 

T75 monolayer culture制成10ml細(xì)胞懸浮液，取0.1ml溶液與0.1ml trypan blue混合均勻于試管中，取少許混合液加入血球計(jì)數(shù)盤，計(jì)數(shù)四大方格內(nèi)之細(xì)胞數(shù)目。 
活細(xì)胞數(shù)/方格：55，62，49，59；死細(xì)胞數(shù)/方格：5，3，4，6；細(xì)胞總數(shù)=243 
平均細(xì)胞數(shù)/方格=60.75；稀釋倍數(shù)=2 
細(xì)胞數(shù)/ml：60.75×104×2（稀釋倍數(shù)）=1.22×106
細(xì)胞數(shù)/flask（10ml）：1.22×106×10ml=12.2×106 
存活率：225/243﹦92.6%