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常用生化試劑的作用

時間:2017/4/12閱讀:1142
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1.蛋白酶K

能水解消化蛋白質(zhì),特別是與DNA結(jié)合的組蛋白。再尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl pH7.5,10mM CaCl2。

2.SDS:

      十二烷基硫酸鈉. 溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜,并解離細(xì)胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀

3.IPTG

      異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等. IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選。作用*的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定

4.X-gal

5--4--3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是IPTG的顯色試劑,在IPTG的催化下顯藍(lán)色。常跟IPTG一起用與藍(lán)白斑篩選。

5.G418:

     一種抗生素,對幾乎所有的細(xì)胞都有毒性,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的選擇試劑。當(dāng)neo基因被整合進真核細(xì)胞基因組合適的地方后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達(dá) ,使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以廣泛應(yīng)用。

6.DMSO

      二甲基亞砜.實驗室常用于作液體層析溶劑,同時用作測試物質(zhì)紫外消光值上時用作參照物.能溶于所有烷烴和烯烴。

7.曲拉通X-100

TritonX-100.用的細(xì)胞裂解液成分之一,在保護蛋白活性方面有一定作用. 能力介于NP40SDS之間,偏向于NP40

8.NP-40

      很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

9、BSA

牛血清白蛋白. 主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用。在動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中,添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液。

10.甲酰胺

     甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩(wěn)定劑,也用于穩(wěn)定毛細(xì)管電泳中的變性單股DNA。

11.TEMED

       四甲基乙二胺。促凝劑。在中性及堿性pH條件下,加入TEMED可加速凝膠聚合

12.巰基乙醇

       一種強還原劑??蛇€原蛋白二硫鍵,從而使蛋白保持溶解狀態(tài),有利于與SDS的結(jié)合。使蛋白解離成單個亞基。

13.甲叉雙丙烯酰胺

N,N'-甲叉雙丙烯酰胺,別名MBA,又叫亞甲基雙丙烯酰胺,次甲基雙丙烯酰胺,N,N'-甲撐雙丙烯酰胺。作交聯(lián)劑與丙烯酰胺聚合而制備聚丙烯酰胺凝膠。

14.過硫酸銨

       過硫酸銨(APS)的作用主要是提供自由基,然后在促凝劑TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。

15.B27

     一種添加劑,用于神經(jīng)肝細(xì)胞培養(yǎng),被認(rèn)為具有抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長的作用。

16.DTT

       二硫蘇糖醇,常用還原劑,既有抗氧化作用。它能保護酶分子上的還原性基團,維持還原性環(huán)境,穩(wěn)定酶的活性。又是一種蛋白質(zhì)變性劑,破壞二硫鍵,濃度不同,起到的作用也不同。

17.弗氏不*佐劑和弗氏*佐劑

     弗氏*佐劑是一種油包水的乳濁液,含結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁成分。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放,并刺激局部免疫反應(yīng)。弗氏不*佐劑用于初次免疫刺激。為了減少副作用,不含結(jié)核分枝桿菌成分的弗氏不*佐劑用于加強免

      氏*佐劑是一種油包水的乳濁液,能夠非常有效的誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體。弗氏*佐劑含結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁成分,可以加強對抗原的抗體反應(yīng)。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放,并刺激局部免疫反應(yīng)。

18.吐溫 20   Tween-20 ,常用的非離子去垢劑。

19.吐溫 80    Tweenum 80 ,除作乳化劑外,也用作某些水中難溶藥物的增溶劑。

20.十二烷基肌氨酸鈉        脫細(xì)胞試劑,制備脫細(xì)胞組織工程支架材料

 

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