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上海研盟生物科技有限公司
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產(chǎn)品型號
品 牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
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更新時間：2017-11-03 14:31:50瀏覽次數(shù)：881次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線上海研盟生物提供美國ATCC傳代細胞株“DLD-1細胞,人結(jié)直腸腺癌上皮細胞步驟說明"，進口來源，國內(nèi)保種，活性保證，咨詢：.
【友情提示】：產(chǎn)品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r，索要說明書；
密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代，提供復(fù)蘇好的細胞株，貼壁及懸浮細胞形式，細胞狀態(tài)良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細胞報價、所需培養(yǎng)基、種屬來源、組織來源、形態(tài)、背景資料等。
注意事項
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
產(chǎn)品名稱：DLD-1細胞,人結(jié)直腸腺癌上皮細胞步驟說明
基本特性：
C細胞數(shù)量：1000000個細胞數(shù)
E細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
凍存和復(fù)蘇原則就是：慢凍、快解凍。因為細胞內(nèi)主要成分還是水，在-20℃時細胞中的水結(jié)成冰晶，而與水相比，冰的密度小而體積大，會造成細胞器膜、細胞膜的損傷，這樣很容易導(dǎo)致細胞復(fù)蘇失敗。
細胞名稱：DLD-1細胞,人結(jié)直腸腺癌上皮細胞步驟說明
細胞特性
組織來源：結(jié)直腸腺癌
培養(yǎng)條件：RPMI-1640 +10% FBS
形態(tài)：貼壁；上皮細胞樣
背景：DLD-1是1977-1979年間D.L. Dexter和同事分離的兩株結(jié)直腸腺癌細胞株中的一株。細胞的CSAp陰性(CSAp-)。DLD-1細胞的p53 抗原表達呈陽性(p53抗原產(chǎn)生了一個C→T點突變導(dǎo)致241位的Ser→Phe)。角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。癌基因c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, myb, sis 和fos的表達呈陽性。癌基因N-myc的表達未做檢測。表達腫瘤特異性核基質(zhì)蛋白CC-2,CC-3,CC-4,CC-5和CC-6。
含量：>1x10的6次方 個/mL
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
細胞接受后的處理：
1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉谩?br />
細胞用途：僅供科研使用。
復(fù)蘇方法
1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。
2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。
3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養(yǎng)液，吹打使細胞懸浮。
4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5．加入培養(yǎng)液適當稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞分裂間期分有3階段
細胞從上一次分裂結(jié)束后到下一次分裂開始的一段時間成為分裂間期。分裂間期以細胞內(nèi)部DNA合成為依據(jù)，又可分為：
1.G1期——DNA合成前期 該期是從上一次細胞周期完成后開始的，剛形成的兩個子細胞，其體積較原有的細胞小。該期特點是物質(zhì)代謝活躍，迅速合成RNA和蛋白質(zhì)，細胞體積顯著增大。這一期的主要意義在于為下階段S期的DNA復(fù)制作好物質(zhì)和能量的準備。
細胞進入G1期后，并不是毫無例外地都進入下一期繼續(xù)增殖，在此時可能會出現(xiàn)三種不同前景的細胞：①增殖細胞：這種細胞能及時從G1期進入S期，并保持旺盛的分裂能力。例如消化道上皮細胞及骨髓細胞等； ②暫不增殖細胞或休止細胞：細胞進入G1期后不立即轉(zhuǎn)入S期，在需要時，如損傷、手術(shù)等，才進入S期繼續(xù)增殖。例如肝細胞及腎小管上皮細胞等；③不增殖細胞：此種細胞進入G1期后，失去分裂能力，終身處于G1期，zui后通過分化、衰老直至死亡。例如高度分化的神經(jīng)細胞、肌細胞及成熟的紅細胞等。
2.S期——DNA合成期 S期主要特征是復(fù)制DNA，使DNA含量增加一倍，保證將來分裂時兩個子細胞的DNA含量不變。從G1期進入S期是細胞周期的關(guān)鍵時刻，只要DNA的復(fù)制一開始，細胞增殖活動就會進行下去，直到分裂成兩個子細胞為止。該期中，如果受到某些因素干擾，會影響到DNA的復(fù)制，而引起\細胞的變異或分裂異常終止。
3.G2期——DNA合成后期 此期主要為分裂期做準備。這一期DNA合成終止，但合成少量RNA和蛋白質(zhì)，可能與構(gòu)成紡錘體的微管蛋白有關(guān)
來源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數(shù)>1000000個，具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點，純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運輸方式：活細胞運輸（T-25 flasks）。
細胞純度：95%。
細胞來源：ATCC等。
包裝：內(nèi)層無菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說明書。
用途：本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。
細胞凍存
１．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存.
，體內(nèi)、外細胞的差異和分化：
1、差異：細胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境，日久天長，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此，培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能，也有一些不同于體內(nèi)細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。
2、分化：體外培養(yǎng)的細胞分化能力并未*喪失，只是環(huán)境的改變，細胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細胞是否表現(xiàn)分化,關(guān)鍵在于是否存在使細胞分化的條件，如Friend細胞（小鼠紅白血病細胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內(nèi)皮細胞在類似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時能長成血管狀結(jié)構(gòu)，雜交瘤細胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體，這些均屬于細胞分化行為。
本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
傳代時間：2-3天 3-5天
傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2
細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細胞實驗安全性：所有細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
研盟生物其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：
人永生化淋巴細胞，CNLMG-B5537LC
人類成纖維細胞，CNLMG-B5537SKIN
人淋巴細胞，1301
人B淋巴細胞，WIL2-S
人外周血B淋巴細胞，IM-9
人淋巴瘤細胞，Romas
A-375 [A375] 細胞， 惡性黑色素瘤細胞 A-375 [A375] 細胞
A-431 細胞， 表皮癌細胞 A-431 細胞
A549 [A-549] 細胞， 肺癌細胞 A549 [A-549] 細胞
A-673 細胞， 橫紋肌瘤細胞 A-673 細胞
A9 細胞， 小鼠皮下結(jié)締組織細胞 A9 細胞
AAV-293 細胞， 胚腎細胞 AAV-293 細胞
Acc-2 細胞， 涎腺腺樣囊性癌細胞 Acc-2 細胞
Acc-3 細胞， 涎腺腺樣囊性癌細胞 Acc-3 細胞
AE-1細胞， 小鼠雜交瘤細胞抗AChE AE-1細胞
AE-2細胞， 小鼠雜交瘤細胞抗AChE AE-2細胞
AGS 細胞， 胃腺癌細胞 AGS 細胞
Ana-1 細胞， 小鼠巨噬細胞 Ana-1 細胞
人類淋巴母細胞瘤細胞，HLCL 4F10
人類淋巴母細胞瘤細胞，HLCL 4B9
人類淋巴母細胞瘤細胞，HLCL 7D7
人類淋巴母細胞瘤細胞，HLCL 9C3
人Burkitt淋巴瘤細胞，Raji
人Burkitt淋巴瘤細胞，Daudi
人Burkitt淋巴瘤細胞，NAMALWA
人B淋巴細胞瘤細胞，Ramos
人T淋巴瘤細胞（Tet-on基因修飾），Jurkat D,E
人T淋巴瘤細胞Jurkat亞系，Jurkat77
s low passage 細胞
293T 細胞， 胚腎細胞 293T 細胞
2V6.11細胞， 胚腎細胞 2V6.11細胞
3T3-L1 細胞， 小鼠脂肪細胞 3T3-L1 細胞
3T3-Swiss albino 細胞， 小鼠胚胎成纖維細胞 3T3-Swiss albino 細胞
3T6-Swiss albino 細胞， 小鼠胚胎成纖維細胞 3T6-Swiss albino 細胞
4T1細胞， 小鼠乳xian癌細胞 4T1細胞
人T淋巴瘤細胞，HUT 102
人T細胞白血病細胞，C8166
人T淋巴細胞白血病細胞，A3
人T細胞白血病細胞，6T-CEM
人T淋巴細胞白血病細胞，HuT 78
IL-2依賴的人淋巴T細胞系，Kit225
人急性T淋巴細胞白血病細胞，Jurkat
人急性T淋巴細胞白血病細胞，JurkatE6-1
人急性T淋巴細胞白血病細胞，Jurkat, Clone E6-1
人急性T淋巴細胞白血病細胞，TALL-104
人急性T淋巴細胞性白血病細胞，I 2.1
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