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大鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒檢測(cè)程序
1.建立標(biāo)準(zhǔn)曲線:設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔,每孔中各加入樣品稀釋液100ul,*孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul,混勻后用加樣器吸出100ul,移至第二孔。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋至第六孔,zui后,從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對(duì)照,第八孔為零孔。
2.加樣:待測(cè)品孔每孔各加入待測(cè)樣品100ul混勻。
3.將反應(yīng)板充分混勻后粘上封板紙置37 oC 120分鐘。
4.洗板:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
5.每孔(除零孔)加*抗體工作液50ul,置37℃ 60分鐘。
6.洗板:操作同4。
7.每孔(除零孔)加酶標(biāo)抗體工作液100ul(兩滴),將反應(yīng)板置37 oC 60分鐘。
8.洗板:同前。
9.每孔加入底物液A、B各一滴,置37 oC避光反應(yīng)15分鐘。
10.終止:每孔加入1滴終止液混勻。
11.測(cè)定:在450nm處測(cè)吸光值。
大鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒簡(jiǎn)單介紹:
品牌:進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
英文名稱(chēng):Rat Interferon α,IFN-α Elisa Kit
產(chǎn)品規(guī)格:
48T(48T檢測(cè)雙標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測(cè)37個(gè)樣本,其他有10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,1個(gè)空白對(duì)照。48T檢測(cè)單標(biāo)準(zhǔn)可以檢測(cè)40個(gè)樣本,其他有7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,1個(gè)空白對(duì)照。 )
96T(96T檢測(cè)雙標(biāo)準(zhǔn)的可以檢測(cè)85個(gè)樣本,其他有10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,1個(gè)空白對(duì)照。96T檢測(cè)單標(biāo)準(zhǔn)可以檢測(cè)90個(gè)樣,7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品控 1個(gè)空白對(duì)照。)
產(chǎn)品用途:本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中待測(cè)物質(zhì)的含量。
產(chǎn)品特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的,且與其他相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。
使用范圍:僅供科研使用,不得用于臨床。
有效期:6個(gè)月
保存條件:2-8℃
實(shí)驗(yàn)原理:
1.本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)水平。用純化的待測(cè)物質(zhì)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測(cè)物質(zhì),再與HRP標(biāo)記的待測(cè)物質(zhì)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)濃度。
2. 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被待測(cè)物質(zhì)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
大鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng):
1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。洗滌過(guò)程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8)實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
9)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
10)加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
11)按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
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