人血小板活化因子（PAF）ELISA試劑盒如何操作
上海研盟生物推薦操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
20 ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
10 ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
5 ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2.5 ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
1.25 ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。人血小板活化因子（PAF）ELISA試劑盒如何操作
人血小板活化因子（PAF）ELISA試劑盒檢測范圍：0.6ng/L - 20ng/L
使用目的： 本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血小板活化因子（PAF）含量。 實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人血小板活化因子（PAF）水平。用純化的人血 小板活化因子（PAF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血小 板活化因子（PAF），再與 HRP 標記的血小板活化因子（PAF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血小板活化因子（PAF）呈正相 關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人血小板活 化因子（PAF）濃度。
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