細(xì)胞:GC-1 spg細(xì)胞
中文名稱:小鼠精原細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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在信號(hào)加工過程之間對(duì)相互作用進(jìn)行特征分析,而這些加工過程由22個(gè)不同受體-配體對(duì)引發(fā),總共有231對(duì)組合。
他們的切入點(diǎn)從檢查每一單個(gè)配體對(duì)于264.7RAW巨嗜細(xì)胞的效果開始,對(duì)鈣元素流、蛋白質(zhì)磷酸化和細(xì)胞因子生產(chǎn)等結(jié)果進(jìn)行定量分析。
獲得了這些單一的特征之后,他們繼續(xù)分析這些成對(duì)的引發(fā)物,接著將最終獲得的結(jié)果與以前預(yù)測(cè)將要在最為簡(jiǎn)單的“額外”場(chǎng)景中發(fā)生的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。
當(dāng)獲得的結(jié)果與以前的預(yù)測(cè)有顯著差異時(shí),他們認(rèn)為在被刺激的各種途徑中存在著一種相互作用,導(dǎo)致了一種更為復(fù)雜的輸入-輸出關(guān)系的產(chǎn)生。
被研究的配體,在生產(chǎn)細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)過程中都至少會(huì)和一個(gè)其它的配體發(fā)生協(xié)同性的交互作用,雖然甚至有幾個(gè)配體對(duì)這些過程并沒有顯示出獨(dú)立的效果。