血栓素A2(TX-A2)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供科研使用。
本試劑盒用于體外檢測人血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
有效期:6個月
保存條件:2-8℃
酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)實驗原理:
本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將待測物質(zhì)和*標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。
血栓素A2(TX-A2)elisa試劑盒現(xiàn)貨組成:
ELISA酶標(biāo)板(可拆卸) Micro ELISA Plate(Dismountable) 96T/48T 4℃/-20℃ #
凍干標(biāo)準(zhǔn)品 Reference Standard 2/1 支 4℃/-20℃ #
標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液 Reference Standard & Sample Diluent 1瓶 20mL/12mL 4℃
濃縮*化抗體 Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支 120μL/70μL 4℃
*化抗體稀釋液 Biotinytated Detection Ab Diluent 1瓶 10mL/6mL 4℃
濃縮HRP酶結(jié)合物 Concentrated HRP Conjugate 1支 120μL/70μL 4℃(避光)
酶結(jié)合物稀釋液 HRP Conjugate Diluent 1瓶 10mL/6mL 4℃
濃縮洗滌液(25×) Concentrated Wash Buffer (25×) Concentrated Wash Buffer (25×) 4℃
底物溶液(TMB) Substrate Reagent 1瓶 10mL/6mL 4℃(避光)
反應(yīng)終止液 Stop Solution 1瓶 10mL/6mL 4℃
封板覆膜 Plate Sealer 2 張
產(chǎn)品說明書 Product Description 1 份
血栓素A2(TX-A2)elisa試劑盒現(xiàn)貨樣品收集、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
血栓素A2(TX-A2)elisa試劑盒現(xiàn)貨操作注意事項
1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2)實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9)按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
血栓素A2(TX-A2)elisa試劑盒現(xiàn)貨操作步驟:
(1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
(2)根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
(3)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
(4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
(5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
(6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
(7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
(8)取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
(9)在450nm波長處測定各孔的OD值。
血栓素A2(TX-A2)elisa試劑盒現(xiàn)貨結(jié)果判斷與分析
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的待測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
血栓素A2(TX-A2)elisa試劑盒現(xiàn)貨試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。