酵母雙雜交檢測(cè)（Yeast Two-Hybrid Assay）產(chǎn)品專(zhuān)題
檢測(cè)原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)（Yeast two-hybrid assay）是用于體內(nèi)研究蛋白相互作用的一種非常便利的工具，常用的如GAL4為基礎(chǔ)的系統(tǒng)，使用酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄激活后的蛋白相互作用。某些轉(zhuǎn)錄因子（如GAL4）由兩個(gè)可以分開(kāi)，功能上相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域組成，N端有一個(gè)147個(gè)氨基酸組成的DNA結(jié)合域（DNA binding domain，BD），C端有一個(gè)由113個(gè)氨基酸組成的轉(zhuǎn)錄激活域（transcription activation domain，AD）。BD可以和上游激活序列（UAS）結(jié)合，而AD能激活UAS下游基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。單獨(dú)的BD或AD不能激活基因轉(zhuǎn)錄，兩者只有通過(guò)某種方式結(jié)合在一起形成完整的轉(zhuǎn)錄激活因子的功能【見(jiàn)圖1】。酵母雙雜交系統(tǒng)主要利用酵母GAL4的這個(gè)特性通過(guò)兩個(gè)雜交蛋白在酵母細(xì)胞中的相互結(jié)合及對(duì)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄激活來(lái)研究活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用，對(duì)蛋白質(zhì)之間微弱、瞬間的作用都能通過(guò)報(bào)告基因敏感的檢測(cè)到。
酵母雙雜交系統(tǒng)應(yīng)用：
- 對(duì)新的與已經(jīng)蛋白相互作用的鑒定
- 對(duì)預(yù)測(cè)蛋白相互作用的確認(rèn)
- 對(duì)蛋白相互作用區(qū)域的鑒定
圖1. 雙雜交檢測(cè)原理圖。兩個(gè)蛋白分別表達(dá)，一個(gè)（誘餌蛋白bait protein）融合到Gal4 DNA結(jié)合域表達(dá)，另一個(gè)（誘捕蛋白prey protein）融合到Gal4轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（AD）表達(dá)。在Y2HGold酵母菌株中，只有當(dāng)兩個(gè)蛋白之間相互作用并結(jié)合到Gal4反應(yīng)性啟動(dòng)子上才能活化報(bào)告基因（AUR1-C, ADE2, HIS3, 和MEL1）的表達(dá)。
酵母雙雜交系統(tǒng)操作流程（以Clontech Matchmarker GAL4-based two hybrid assay為例）
完整的Matchmarker篩選過(guò)程包含以下步驟：
*步：執(zhí)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)；
第二步：誘餌載體的構(gòu)建及自我激活和毒性檢測(cè)；
第三步：篩選Mate&Plate文庫(kù)
第四步：確認(rèn)和闡釋結(jié)果
圖3. 使用Mate&Plate文庫(kù)進(jìn)行雙雜交篩選。捕獲蛋白（bait protein）是酵母菌Y2HGold表達(dá)的Gal4 DNA-BD融合蛋白。高復(fù)雜性文庫(kù)表達(dá)Gal4 AD融合蛋白，由Y187酵母菌提供。當(dāng)兩種轉(zhuǎn)化菌株混合過(guò)夜能接合產(chǎn)生二倍體（Diploids）。此二倍體含有4個(gè)報(bào)告基因：HIS3，ADE2，MEL1和AUR1-C，受雙雜交作用而活化表達(dá)。
酵母雙雜交檢測(cè)需要產(chǎn)品信息：
我司（懋康生物）提供酵母雙雜交研究需要的一系列產(chǎn)品，從酵母菌株、酵母質(zhì)粒、酵母培養(yǎng)基到篩選標(biāo)志（抗生素），咨詢(xún)，，：2971634497。
一、富集培養(yǎng)基（Rich Medium 酵母培養(yǎng)）
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MS6301-350G | YPD Agar Medium YPD瓊脂培養(yǎng)基 | 350g | 550 |
MS6302-250G | YPD Medium YPD液體培養(yǎng)基 | 250g | 438 |
MS6303-350G | YPDA Agar Medium YPDA瓊脂培養(yǎng)基 | 350g | 550 |
MS6304-250G | YPDA Medium YPDA液體培養(yǎng)基 | 250g | 438 |
【補(bǔ)充描述】：
- YPD是用于大多數(shù)酵母菌生長(zhǎng)所需的酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖優(yōu)化配比后組成的混合物；
- YPDA培養(yǎng)基是在YPD基礎(chǔ)上添加硫酸腺嘌呤，終濃度120 µg/ml。
二、基本培養(yǎng)基（Minimal Medium 酵母培養(yǎng)）
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MS6311-467G | Minimal SD Agar Base SD瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 467g | 1428 |
MS6312-267G | Minimal SD Base SD基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 267g | 768 |
MS6313-270G | Minimal SD Agar Base Gal/Raf SD瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含半乳糖/棉子糖） | 270g | 1428 |
MS6314-185G | Minimal SD Base Gal/Raf SD基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含半乳糖/棉子糖） | 185g | 988 |
【補(bǔ)充描述】：
- SD Medium：酵母菌用的基本的合成限定培養(yǎng)基（Minimal synthetically defined medium），包含氮源，碳源（葡萄糖，除非有特殊說(shuō)明）和DO添加劑（Dropout Supplement）。
- DO（Dropout Supplement or Solution）：特定氨基酸和核苷的混合物，添加到SD base內(nèi)以配制SD Medium。DO缺少一種或者更多未轉(zhuǎn)化酵母菌需要的營(yíng)養(yǎng)成分使其在SD Medium上生長(zhǎng)，作為營(yíng)養(yǎng)篩選標(biāo)志。
三、省卻成分氨基酸混合物（DO Supplements 酵母培養(yǎng)）
類(lèi)型 | 名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Single Dropout Supplements (SDO) 單一省卻成分添加劑 | DO Supplement -His | MS6316-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Leu | MS6317-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Trp | MS6318-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Ura | MS6319-10G | 10g | 418 |
Double Dropout Supplements (DDO) 雙省卻成分添加劑 | DO Supplement -His/-Leu | MS6320-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -His/-Ura | MS6321-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Leu/-Trp | MS6322-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Met/-Trp | MS6323-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Trp/-Ura | MS6324-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Trp/-His | MS6325-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Ura/-Leu | MS6326-10G | 10g | 418 |
Triple Dropout Supplements (TDO) 三省卻成分添加劑 | DO Supplement -His/-Leu/-Trp | MS6331-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -His/-Leu/-Ura | MS6332-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -His/-Trp/-Ura | MS6333-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Leu/-Met/-Trp | MS6334-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Leu/-Trp/-Ura | MS6335-10G | 10g | 418 |
Quadruple Dropout Supplements (QDO) 四省卻成分添加劑 | DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp | MS6341-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp | MS6342-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -His/-Leu/-Trp/-Ura | MS6343-10G | 10g | 418 |
四、篩選抗生素（底物）
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MS0002-1ML | Aureobasidin A （AbA）金擔(dān)子素A（1 mg/ml） | 1ml | 900 |
MF2003-25MG | X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 | 25mg | 285 |
MF2001-1G | X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 | 1g | 280 |
【補(bǔ)充描述】：
1）Aureobasidin A （AbA）金擔(dān)子素A是報(bào)告基因AUR1-C的篩選抗生素，以判斷酵母菌是否能表達(dá)賦予其AbA抗性的酶。
2）X-α-Gal是α-半乳糖苷酶（由MEL1基因編碼）的底物，當(dāng)雙雜交發(fā)生時(shí)MEL1報(bào)告基因正常表達(dá)催化底物發(fā)生顏色反應(yīng)，使得酵母菌落呈藍(lán)色。
3）X-Gal是ß-半乳糖苷酶（由lacz基因編碼）的底物。
五、酵母質(zhì)粒提取試劑盒
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
D3376-01 | 酵母質(zhì)粒抽提試劑盒 Yeast Plasmid Kit（Omega Biotek） | 50次 | 495 |
【試劑盒工作原理】：
該試劑盒把硅膠柱純化技術(shù)同經(jīng)典的SDS堿裂解法結(jié)合起來(lái)，用戶(hù)可在1小時(shí)內(nèi)從酵母培養(yǎng)液中純化出高純度的質(zhì)粒DNA。純化過(guò)程不需用任何到有害的有機(jī)物抽提，亦不需用到耗時(shí)的乙醇沉淀。質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量依賴(lài)于酵母攜帶質(zhì)粒的拷貝數(shù)，酵母菌株以及生長(zhǎng)條件。 一般來(lái)說(shuō)，酵母質(zhì)粒的拷貝數(shù)較低，5.0ml過(guò)夜培養(yǎng)液中質(zhì)粒DNA產(chǎn)量約為1.0 µg左右。純化的質(zhì)粒可直接用于酶切，PCR,電轉(zhuǎn)化等應(yīng)用。酵母收集后,加入破壁酶和玻璃珠去除細(xì)胞壁,用傳統(tǒng)堿裂法裂解細(xì)胞，然后將獲得的上清液轉(zhuǎn)移至結(jié)合柱結(jié)合DNA，經(jīng)過(guò)兩次快速洗滌，zui后用無(wú)菌水洗脫出質(zhì)粒DNA。
六、酵母轉(zhuǎn)化試劑盒
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2501-200T | Yeast Transformation Kit 酵母轉(zhuǎn)化試劑盒 | 200T | 768 |
【補(bǔ)充描述】：
酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化試劑盒，含PEG/liAC酵母轉(zhuǎn)化需要的所有試劑，操作簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)化效率高。
七、酵母雙雜交菌和感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2351-300UL | Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌 | 300μl | 咨詢(xún) |
MF2352-100UL | Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 100μl | 咨詢(xún) |
MF2353-300UL | Y187 Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌 | 300μl | 咨詢(xún) |
MF2354-100UL | Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 100μl | 咨詢(xún) |
八、酵母菌載體
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF3601-20UL | pGBKT7 DNA-BD Vector 酵母雙雜交克隆載體 | 20μl | 咨詢(xún) |
MF3602-20UL | pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體 | 20μl | 咨詢(xún) |
MF3603-20UL | pGBKT7-Lam Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體 | 20μl | 咨詢(xún) |
MF3604-20UL | pGADT7-AD Vector 酵母雙雜交克隆載體 | 20μl | 咨詢(xún) |
MF3605-20UL | pGADT7-T Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體 | 20μl | 咨詢(xún) |
MF3606-20UL | pBridge Vector 酵母三雜交克隆載體 | 20μl | 咨詢(xún) |
MF3609-20UL | pGBT9 Vector 酵母雙雜交克隆載體 | 20μl | 咨詢(xún) |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠(chéng)為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供產(chǎn)品。
