檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人克里米亞剛果出血熱IgG抗體（CCHFV-IgG）的存在與否。
樣品收集、處理及保存方法
1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標(biāo)儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.  預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋，直接取50μL加樣即可。
4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.  所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱    96孔配置    48孔配置    備注
微孔酶標(biāo)板    12孔×8條    12孔×4條    無(wú)
陰性對(duì)照    0.5mL     0.5mL     無(wú)
陽(yáng)性對(duì)照    0.5mL     0.5mL     無(wú)
檢測(cè)抗原-HRP    10mL    5mL    無(wú)
20×洗滌緩沖液    25mL    15mL    按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A    6mL    3mL    無(wú)
底物B    6mL    3mL    無(wú)
終止液    6mL    3mL    無(wú)
封板膜    2張    2張    無(wú)
說(shuō)明書(shū)    1份    1份    無(wú)
自封袋    1個(gè)    1個(gè)    無(wú)

試劑的準(zhǔn)備
 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL；
3.  待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本50μL；
4.  隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
 1.  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；
                陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。
2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4.  陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15，說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
5. 有效期：6個(gè)月
免責(zé)聲明
1.  試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。