小鼠安定結(jié)合抑制因子(DBI)ELISA試劑盒深圳子科生物ELISA試劑盒供應(yīng)商,擁有多年的研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn),擁有*的儀器設(shè)備,專業(yè)的技術(shù)人員和*的實(shí)驗(yàn)技術(shù),目前已經(jīng)建立強(qiáng)大的實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)平臺(tái),品牌設(shè)立為:ZIKER 。
完整的小鼠安定結(jié)合抑制因子(DBI)ELISA試劑盒包含以下各組分:
1、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
2、酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
3、酶的底物;
4、陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);
5、結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
6、洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的zui終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。
小鼠安定結(jié)合抑制因子(DBI)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無(wú)聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高,而您懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
封閉更關(guān)鍵
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過(guò)高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。
如果您一直被背景問(wèn)題所困擾,那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,在去除洗滌過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用,因?yàn)楹苋菀妆幌吹?。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請(qǐng)勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會(huì)降低特異結(jié)合,產(chǎn)生假陰性。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同,是*的。它們與開(kāi)放位點(diǎn)結(jié)合并封閉,同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過(guò),它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個(gè)問(wèn)題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
抗體濃度須優(yōu)化
我們通常會(huì)記錄每次試驗(yàn)留下來(lái)的操作步驟,但是如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。
檢測(cè)試劑要適量
另一點(diǎn)也很顯而易見(jiàn):切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高,或者未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景,那么也無(wú)需太擔(dān)心,依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分,并排除可能存在的問(wèn)題。悉心優(yōu)化,相信很快就會(huì)有漂亮的結(jié)果。
小鼠安定結(jié)合抑制因子(DBI)ELISA試劑盒0596P Bacillus coagulans derived from ATCC® 7050™* 凝固芽胞桿菌 ATCC® 7050™* 2株/包
0812P Bacillus licheniformis derived from ATCC® 12759™* 地衣芽孢桿菌 ATCC®12759™* 2株/包
0799P Bacillus licheniformis derived from ATCC® 14580™* 地衣芽孢桿菌 ATCC® 14580™* 2株/包
0201P Bacillus megaterium derived from ATCC® 14581™* 巨大芽胞桿菌 ATCC® 14581™* 2株/包
0116P Bacillus megaterium derived from ATCC® 9885™* 巨大芽胞桿菌 ATCC® 9885™* 2株/包
0258P Bacillus pumilus derived from ATCC® 14884™* 短小芽胞桿菌 ATCC® 14884™* 2株/包
0577P Bacillus pumilus derived from ATCC® 700814™* 短小芽胞桿菌 ATCC® 700814™* 2株/包
0474P Bacillus pumilus derived from ATCC® BAA-1434™* 短小芽胞桿菌 ATCC® BAA-1434™* 2株/包
0269P Bacillus subtilis derived from ATCC® 11774™* 枯草芽孢桿菌 ATCC® 11774™* 2株/包
0540P Bacillus subtilis derived from ATCC® 19659™* 枯草芽孢桿菌 ATCC® 19659™* 2株/包
0486P Bacillus subtilis subsp. spizizenii derived from ATCC® 6633™* 枯草芽孢桿菌 ATCC®6633™* 2株/包
0582P Bacillus subtilis subsp. spizizenii derived from NCIMB 8054 枯草芽孢桿菌 NCIMB 8054 2株/包
0120P Bacillus subtilis subsp. subtilis derived from ATCC® 6051™* 枯草芽孢桿菌 ATCC® 6051™* 2株/包
0270P Bacillus thuringiensis derived from ATCC® 10792™* 蘇云金芽孢桿菌 ATCC® 10792™* 2株/包
0539P Bacillus thuringiensis derived from ATCC® 33679™* 蘇云金芽孢桿菌 ATCC® 33679™* 2株/包
0940P Bacteroides fragilis derived from ATCC® 23745™* 脆弱擬桿菌 ATCC® 23745™* 2株/包
0320P Bacteroides fragilis derived from ATCC® 25285™* 脆弱擬桿菌 ATCC®25285™* 2株/包
0358P Bacteroides fragilis derived from NCTC 9343 脆弱擬桿菌 NCTC 9343 2株/包
0400P Bacteroides ovatus derived from ATCC® 8483™* 卵形擬桿菌 ATCC®8483™* 2株/包
0585P Bacteroides ovatus derived from ATCC® BAA-1296™* 卵形擬桿菌 ATCC® BAA-1296™* 2株/包
0587P Bacteroides ovatus derived from ATCC® BAA-1304™* 卵形擬桿菌 ATCC® BAA-1304™* 2株/包
0319P Bacteroides thetaiotaomicron derived from ATCC® 29741™* 多形擬桿菌 ATCC®29741™* 2株/包
0619P Bacteroides uniformis derived from ATCC® 8492™* 單形擬桿菌 ATCC®8492™* 2株/包
0908P Bacteroides ureolyticus derived from ATCC® 33387™* 解脲擬桿菌 ATCC®33387™* 2株/包
0848P Bacteroides vulgatus derived from ATCC® 29327™* 普通擬桿菌 ATCC® 29327™* 2株/包
0445P Bacteroides vulgatus derived from ATCC® 8482™* 普通擬桿菌 ATCC®8482™* 2株/包