牛白介素4(IL4) ELISA試劑盒詳細(xì)產(chǎn)品檢測(cè)范圍、購(gòu)買方式、發(fā)貨周期、技術(shù)疑問可以咨詢?cè)诰€客服。
ELISA試劑盒在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性問題,子科生物技術(shù)部根據(jù)多年研發(fā)和臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下:
1、試劑盒特異性因素
1)固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此,在選擇試劑盒同時(shí)要對(duì)其使用的微孔板型號(hào)進(jìn)行認(rèn)證,評(píng)估。
2)包被物的純度。在酶聯(lián)免疫測(cè)定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術(shù)條件的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達(dá)到100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡可能提高純度,提高特異性。目前使用的包被抗原一般為合成多肽抗原。
3)包被抗體的效價(jià)。具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決定試劑特異性的重要方面。
4 )封閉。是ELISA中重要的一步,目的是封閉固相載體表面尚未被所占據(jù)的空隙,減少后續(xù)步驟中非特異性蛋白的干擾。
2、操作過程中的問題造成假陽(yáng)性
1)加樣
對(duì)于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的誤差,會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差,使陰性(或弱陽(yáng)性)標(biāo)本呈陽(yáng)性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。
2)洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3) 溫育
每種試劑都有其佳反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),會(huì)造成整板本底高,陽(yáng)性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。
4)酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測(cè)定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對(duì)濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置要正確,使用雙波長(zhǎng),一個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng),一個(gè)參比波長(zhǎng),以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同。
牛白介素4(IL4) ELISA試劑盒木聚糖(Xylan) 5g
糊精(Dextrin) 250g
幾丁質(zhì)(甲殼素,Chitin) 10g
直鏈淀粉(Amylose) 250mg
支鏈淀粉(Amylopectin) 500mg
氨甲喋呤(Amethopterin) 10mg
氨基喋呤(Aminopterin) 5mg
5-溴-2’-脫氧尿苷(5-Bromo-2’-Deoxyuridine) 100mg
5’-三磷酸腺苷二鈉(ATP Na2) 1g
5’-磷酸腺苷二鈉(AMPNa2) 5g
5’-二磷酸腺苷二鈉(ADPNa2) 250mg
四氧嘧啶(Alloxan) 5g
腺苷(Adenosine) 10g
次黃嘌呤(Hypoxanthine) 1g
鳥苷(Guanosine) 10g
胸腺嘧啶核苷(Thymidine) 1g
胸腺嘧啶(Thymine) 5g
尿嘧啶(Uracil) 50g
尿苷(Uridine) 5g
黃嘌呤(Xanthine) 1g
硫酸腺嘌呤(Adenine Sulfate) 5g
腺嘌呤(Adenine) 10g
甘氨酸(Glycine) 500g
S-腺苷同型半胱氨酸(S-Adenosyl-L-homocysteine) 5mg
L-組氨酸(L-Histidine) 25g
L-谷胱甘肽(還原型),L-Glutathione(Reduced Form) 5g
L-谷胱甘肽(氧化型),L-Glutathione(Oxidized Form) 1g
3-硝基酪氨酸(3-NT) 250mg
ACES 10g
AMPSO 25g
ADA生物緩沖劑(ADA Biobuffer) 10g
N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸(BES) 10g
N,N-雙(2-羥乙基)甘氨酸(Bicine) 10g
BES緩沖劑(BES, Free Acid) 10g
Bicine緩沖劑(Bicine) 10g
Bis-Tris緩沖劑(Bis-Tris) 25g
Bis-Tris Propane緩沖劑(Bis-Tris Propane) 5g
3-(環(huán)己胺)-1-丙磺酸(CAPS) 10g
2-(環(huán)己胺)-1-乙磺酸(CHES) 10g
DIPSO緩沖劑(DIPSO) 10g
2-(N-嗎啡啉)乙磺酸(MES) 10g
3-(N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS) 10g
MOPSO緩沖劑(MOPSO) 25g