中國(guó)國(guó)民核生化災(zāi)害防護(hù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室防化研究院的研究人員利用elisa技術(shù)以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測(cè)對(duì)象，建立了一種高靈敏的電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法。該論文已發(fā)表于近期的《分析化學(xué)》雜志上。

傳統(tǒng)的磁免疫電化學(xué)發(fā)光(ECL)檢測(cè)方法是將磁微球用作捕獲抗體的載體，利用其較大的反應(yīng)面積及順磁性來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)物的快速結(jié)合與分離。由于單個(gè)抗體分子用作標(biāo)記探針時(shí)表面可修飾的基團(tuán)有限，在靶標(biāo)濃度很低時(shí)，標(biāo)記探針數(shù)量很少，很難檢測(cè)到，這影響到靈敏度的進(jìn)一步提高。

本研究將酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)在酶標(biāo)板上進(jìn)行的抗體包被、封閉、抗原結(jié)合、二抗結(jié)合等程序化的操作步驟與磁微球作為標(biāo)記探針載體的優(yōu)勢(shì)相結(jié)合，以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測(cè)對(duì)象，建立了一種高靈敏的電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖所示，首先在酶標(biāo)板上吸附固定相思子毒素多抗，與相思子毒素作用后再與生物素化的單抗結(jié)合，形成雙抗體夾心免疫復(fù)合物，然后通過(guò)生物素-鏈霉親和素特異相互作用連接三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的親和素包被磁性微球形成磁性微球免疫復(fù)合物。將復(fù)合物從酶標(biāo)板上解離后進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

這樣，結(jié)合于酶標(biāo)板的磁微球的量即可反映Abrin 的濃度，且磁微球表面攜帶大量標(biāo)記物，可放大檢測(cè)信號(hào)，提高檢測(cè)的靈敏度。利用此方法檢測(cè)相思子毒素，濃度在2-200 ng/ L 范圍內(nèi)與電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈良好的對(duì)數(shù)線性關(guān)系，檢測(cè)限達(dá)2 ng/ L。該方法靈敏度較傳統(tǒng)方法提高兩個(gè)數(shù)量級(jí)，也遠(yuǎn)高于目前國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的方法。該法特異性高、重現(xiàn)性好，可用于痕量蛋白的高靈敏檢測(cè)，在臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、生物防護(hù)等領(lǐng)域有較好的應(yīng)用前景。

論文鏈接：A New Electrochemiluminescence Immunoassay Based on Magnetic Microbeads as Carrier of Labels