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中國科學(xué)家新建立一種高靈敏的電化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法

時間:2016/6/22閱讀:393
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中國國民核生化災(zāi)害防護國家重點實驗室防化研究院的研究人員利用elisa技術(shù)以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測對象,建立了一種高靈敏的電化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法。該論文已發(fā)表于近期的《分析化學(xué)》雜志上。

傳統(tǒng)的磁免疫電化學(xué)發(fā)光(ECL)檢測方法是將磁微球用作捕獲抗體的載體,利用其較大的反應(yīng)面積及順磁性來實現(xiàn)對檢測物的快速結(jié)合與分離。由于單個抗體分子用作標記探針時表面可修飾的基團有限,在靶標濃度很低時,標記探針數(shù)量很少,很難檢測到,這影響到靈敏度的進一步提高。

本研究將酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)在酶標板上進行的抗體包被、封閉、抗原結(jié)合、二抗結(jié)合等程序化的操作步驟與磁微球作為標記探針載體的優(yōu)勢相結(jié)合,以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測對象,建立了一種高靈敏的電化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法。實驗過程如圖所示,首先在酶標板上吸附固定相思子毒素多抗,與相思子毒素作用后再與生物素化的單抗結(jié)合,形成雙抗體夾心免疫復(fù)合物,然后通過生物素-鏈霉親和素特異相互作用連接三聯(lián)吡啶釕標記的親和素包被磁性微球形成磁性微球免疫復(fù)合物。將復(fù)合物從酶標板上解離后進行電化學(xué)發(fā)光檢測。

這樣,結(jié)合于酶標板的磁微球的量即可反映Abrin 的濃度,且磁微球表面攜帶大量標記物,可放大檢測信號,提高檢測的靈敏度。利用此方法檢測相思子毒素,濃度在2-200 ng/ L 范圍內(nèi)與電化學(xué)發(fā)光強度呈良好的對數(shù)線性關(guān)系,檢測限達2 ng/ L。該方法靈敏度較傳統(tǒng)方法提高兩個數(shù)量級,也遠高于目前國內(nèi)外已報道的方法。該法特異性高、重現(xiàn)性好,可用于痕量蛋白的高靈敏檢測,在臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測、生物防護等領(lǐng)域有較好的應(yīng)用前景。

論文鏈接:A New Electrochemiluminescence Immunoassay Based on Magnetic Microbeads as Carrier of Labels

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