冰凍切片彈性纖維（ELASTIC）馬森（MASSON）染色試劑盒產(chǎn)品說明書 主要用途 冰凍切片彈性纖維（ELASTIC）馬森（MASSON）染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)脫蠟方法和偉郝夫（Verhoeff）蘇木素以及三色染料（trichrome），分析和區(qū)分冰凍組織切片中的彈性纖維的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實驗證明的。廣泛用于結(jié)締組織、肌肉組織和纖維蛋白的研究等。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。 技術(shù)背景 彈性纖維（elastic fiber），又稱為黃色纖維（yellow fiber），是固有結(jié)締組織（Connective tissue proper）細胞外基質(zhì)的成分之一，由平滑肌細胞和成纖維細胞產(chǎn)生彈力蛋白質(zhì)（elastin）、原纖維蛋白（fibrillin；FBN）等構(gòu)成。彈性纖維具有可伸展性。存在于皮膚、肺、動脈、靜脈、彈力軟骨、牙周韌帶（periodontal ligament）、脂肪組織中。彈性纖維缺失導(dǎo)致皮膚松弛癥（cutis laxa）、威廉姆斯綜合征（Williams Syndrome）等疾病?；谀α_利 （mallory）應(yīng)用三色系統(tǒng)的方法，馬森（masson）進行了改良，在三色復(fù)合染料體系中，使用苯胺籃（aniline blue）替代綠籃。同時使用偉郝夫（Verhoeff）蘇木素選擇性染色彈性纖維，三色復(fù)合染料幫助區(qū)別其它包括肌肉、膠原纖維、纖維蛋白（fibrin）等組織成分。馬森方法操作復(fù)雜，可以細致區(qū)分多種組織成分。 產(chǎn)品內(nèi)容 清理液（Reagent A） 200毫升 固著液（Reagent B） 10毫升 韋格液（Reagent C） 100毫升 祛色液（Reagent D） 20毫升 岑克液（Reagent E） 100毫升 范氏液（Reagent F） 10毫升 比氏液（Reagent G） 10毫升 酸性液（Reagent H） 10毫升 染色液（Reagent I） 10毫升 修正液（Reagent J） 10毫升 脫水液A（Reagent K） 10毫升 脫水液B（Reagent L） 10毫升 透明液（Reagent M） 10毫升 產(chǎn)品說明書 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意安全；有效保證6月 用戶自備 小型玻璃染色缸：用于組織或切片處理的容器 培養(yǎng)箱或烘箱：用于樣品反應(yīng)孵育 微波爐：用于樣品反應(yīng)孵育處理 中性樹脂：用于切片封片 光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析 實驗步驟 一、樣品固著處理 1．準(zhǔn)備好5微米厚的冰凍切片 2．小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 3．室溫下孵育2分鐘 4．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 5．小心加上200微升固著液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 6．室溫下孵育5分鐘 7．小心移去切片上的固著液（Reagent B） 8．小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 9．室溫下孵育2分鐘 10．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 二、樣本染色處理 操作一：標(biāo)準(zhǔn)染色 1．小心加入1毫升韋格液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 2．放進60℃恒溫培養(yǎng)箱孵育60分鐘 3．小心移去韋格液（Reagent C） 4．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 5．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 6．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 7．室溫下孵育5分鐘 8．小心移去祛色液（Reagent D） 9．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 10．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 11．小心加入1毫升岑克液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 12．放進60℃恒溫培養(yǎng)箱孵育60分鐘 13．小心移去岑克液（Reagent E） 14．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 15．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 16．小心加入200微升范氏液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 17．室溫下孵育30分鐘 18．小心移去范氏液（Reagent F） 19．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 20．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 21．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 22．室溫下孵育5分鐘 23．小心移去祛色液（Reagent D） 24．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 25．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 26．小心加入200微升比氏液（Reagent G）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 27．室溫下孵育5分鐘（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果） 28．小心移去比氏液（Reagent G） 29．小心加入200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 30．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 31．重復(fù)實驗步驟29至30二次 32．小心加入200微升酸性液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：可以孵育15分鐘，增強染色效果） 33．小心移去切片上的酸性液（Reagent H） 34．小心加上200微升 染色液（Reagent I）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 35．室溫下孵育5分鐘，避免光照（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果） 36．小心移去切片上的染色液（Reagent I） 37．小心加上200微升 修正液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 38．室溫下孵育2分鐘 39．小心移去切片上的修正液（Reagent J） 40．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 41．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 42．（選擇步驟）小心加上200微升脫水液A（Reagent K）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：如果比氏液（Reagent G）染色過深，建議使用由此步驟開始的選擇步驟，并快速操作） 43．（選擇步驟）小心移去切片上的脫水液A（Reagent K） 44．（選擇步驟）小心加上200微升脫水液B（Reagent L）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 45．（選擇步驟）小心移去切片上的脫水液B（Reagent L） 46．（選擇步驟）小心加上200微升透明液（Reagent M）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 47．（選擇步驟）小心移去切片上的透明液（Reagent M） 48．放上蓋玻片或封片（中性樹脂） 49．即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察： 彈性纖維――呈現(xiàn)黑色 細胞核――呈現(xiàn)黑色 細胞質(zhì)――呈現(xiàn)紅色 肌纖維――呈現(xiàn)紅色 角蛋白――呈現(xiàn)紅色 膠原纖維――呈現(xiàn)藍色 操作二：熱處理染色 1．準(zhǔn)備3個50毫升燒杯或小型染色缸，分別加入50毫升清理液（Reagent A）、韋格液（Reagent C）和岑克液（Reagent E） 2．小心放進上述固著處理的切片到50毫升韋格液（Reagent C）小型染色缸里 3．放進微波爐（600瓦）加熱45秒 4．小心移去切片上的韋格液（Reagent C） 5．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 6．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 7．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 8．室溫下孵育5分鐘 9．小心移去祛色液（Reagent D） 10．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 11．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 12．小心將切片置入50毫升岑克液（Reagent E）小型染色缸里 13．放進微波爐（600瓦）加熱60秒 14．小心移去岑克液（Reagent E） 15．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 16．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 17．小心加入200微升范氏液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 18．室溫下孵育30分鐘 19．小心移去范氏液（Reagent F） 20．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 21．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 22．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 23．室溫下孵育5分鐘 24．小心移去祛色液（Reagent D） 25．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 26．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 27．小心加入200微升比氏液（Reagent G）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 28．室溫下孵育5分鐘（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果） 29．小心移去比氏液（Reagent G） 30．小心加入200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 31．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 32．重復(fù)實驗步驟30至31二次 33．小心加入200微升酸性液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 34．室溫下孵育10分鐘（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果） 35．小心移去切片上的酸性液（Reagent H） 36．小心加上200微升 染色液（Reagent I）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 37．室溫下孵育5分鐘，避免光照（注意：可以延長至15分鐘，增強染色效果） 38．小心移去切片上的染色液（Reagent I） 39．小心加上200微升 修正液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 40．室溫下孵育1分鐘 41．小心移去切片上的修正液（Reagent J） 42．室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘 43．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 44．（選擇步驟）小心加上200微升脫水液A（Reagent K）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：如果比氏液（Reagent G）染色過深，建議使用由此步驟開始的選擇步驟，并快速操作） 45．（選擇步驟）小心移去切片上的脫水液A（Reagent K） 46．（選擇步驟）小心加上200微升脫水液B（Reagent L）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 47．（選擇步驟）小心移去切片上的脫水液B（Reagent L） 48．（選擇步驟）小心加上200微升透明液（Reagent M）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面 49．（選擇步驟）小心移去切片上的透明液（Reagent M） 50．放上蓋玻片或封片（中性樹脂） 51．即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察： 彈性纖維――呈現(xiàn)黑色 細胞核――呈現(xiàn)黑色 細胞質(zhì)――呈現(xiàn)紅色 肌纖維――呈現(xiàn)紅色 角蛋白――呈現(xiàn)紅色 膠原纖維――呈現(xiàn)藍色 注意事項 1．本產(chǎn)品為50次操作 2．操作時，須戴手套 3．試劑具有腐蝕性，注意操作安全 4．建議使用玻璃染色缸 5．每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干 6．試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面 7．整個操作，在避光狀態(tài)下進行 8．染色完成后，即刻進行光學(xué)顯微鏡觀察 9．樣品染色后保存，避免光照 10．本公司提供系列特定組織染色試劑產(chǎn)品 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰