英文名稱：RNeasy Plus Mini Kit (50)
中文名稱：總RNA小提試劑盒（去除gDNA） (50)
品 牌：Qiagen
貨 號(hào)：74134
從細(xì)胞/組織樣本中純化不含*的總RNA，配有基因組DNA去除柱
*的GDNA Eliminator柱，無需DNase處理
數(shù)分鐘內(nèi)得到高品質(zhì)RNA，提取流程方便快捷
產(chǎn)物RNA不含*
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RNeasy Plus Kits將快速方便的RNA純化步驟和有效去除基因組DNA污染整合在一起。使用該試劑盒能夠從多種培養(yǎng)細(xì)胞和易裂解組織中純化獲得高純度、高產(chǎn)量RNA。RNeasy Plus Mini Kit 一次能夠純化獲得100 µg總RNA（>200 nt），并且高效去除基因組DNA。RNeasy Plus Micro Kit則適用于樣本量較少的情況，可分離獲得45 µg總RNA。該試劑盒可在QIAcube*上實(shí)現(xiàn)自動(dòng)操作，可用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的穩(wěn)定組織樣本。
特點(diǎn) | 參數(shù) |
應(yīng)用 | Northern, dot, and slot blotting, end-point RT-PCR, quantitative, real-time RT-PCR, array analysis, next-generation sequencing/ RNA-Seq |
洗脫體積 | 14 µl (micro kit), 30-50 µl (mini kit) |
規(guī)格 | Spin column |
整合基因組DNA去除步驟 | Yes |
主要樣本類型 | Tissue, cells |
處理 | Manual (centrifugation) – automatable on QIAcube |
純化總RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 | Total RNA |
樣本量 | 5 x 10e5 cells or 5 mg tissue (micro kit), 10e7 cells or 30 mg (<700 µl) (mini kit) |
技術(shù) | Silica technology |
每次運(yùn)行或制備時(shí)間 | 25 min |
產(chǎn)量 | Varies |
性能
使用RNeasy Plus技術(shù)從細(xì)胞和組織中提取RNA，產(chǎn)物不含基因組DNA，產(chǎn)量高、可重復(fù)性好，適用于敏感的下游應(yīng)用（參見Effective cell genomic DNA removal, Effective tissue genomic DNA removal, High, reproducible RNA yields和Array-ready RNA）。從組織和培養(yǎng)細(xì)胞中提取的RNA完整性Agilent RIN數(shù)值接近10。
該試劑盒純化產(chǎn)物不含短于200個(gè)核苷酸的RNA（如rRNA和tRNA），因此有富集mRNA的效果。如需從培養(yǎng)細(xì)胞中分離獲得含有小RNA（如miRNA）的總RNA，我們提供專門的分離方案作為補(bǔ)充，請(qǐng)參見產(chǎn)品使用手冊(cè)。
總RNA小提試劑盒（去除gDNA）原理
細(xì)胞和易裂解組織首先在含有異硫氰酸胍的高變性Buffer RLT Plus中裂解和勻質(zhì)化，能使RNases立即失活，以保證分離到完整的RNA。裂解液再流過gDNA Eliminator柱。該離心柱與高鹽緩沖液共同作用，可選擇性高效的去除基因組DNA。加入乙醇以提供RNA結(jié)合的合適條件，樣本再加入到RNeasy離心柱。含有硅膠膜的特制離心柱能特異性的結(jié)合裂解細(xì)胞中的RNA。
對(duì)于多脂和難裂解組織，*使用RNeasy Plus Universal Kits。對(duì)于高通量的總RNA純化，*使用RNeasy Plus 96 Kit。如需從其他類型樣本中分離含有miRNA的總RNA，*使用miRNeasy Kits。
操作流程
RNeasy Plus Micro Kit能從多達(dá)5 x 105個(gè)細(xì)胞或5 mg組織中分離總RNA，RNeasy Plus Mini Kit能夠從107個(gè)細(xì)胞或30 mg組織中分離總RNA。簡(jiǎn)潔的工作流程可在25分鐘內(nèi)純化得到已去除基因組DNA的RNA。樣本首先被裂解和勻質(zhì)化。裂解液流過gDNA Eliminator柱，在流過gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇，樣本再上樣到RNeasy離心柱。RNA結(jié)合到膜上，污染物被洗去。獲得高品質(zhì)RNA，RNeasy Plus Micro Kit的洗脫體積為14 µl，RNeasy Plus Mini Kit的洗脫體積為30 µl。
處理不同的起始樣本可用不同的實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)方案的不同之處主要在于樣本的裂解和勻質(zhì)化。樣本上樣到gDNA Eliminator柱之后的步驟就類似。
使用Buffer RLT Plus（RNeasy Plus Micro Kit提供）進(jìn)行組織破碎和勻質(zhì)化時(shí)，可能會(huì)產(chǎn)生過多泡沫。在破碎和勻漿前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX（單獨(dú)提供）可充分減少泡沫產(chǎn)生。Reagent DX經(jīng)仔細(xì)檢測(cè)，表明配合此試劑盒使用不會(huì)影響RNA的純度或下游應(yīng)用。
應(yīng)用
RNeasy Plus Kit純化得到的RNA適合對(duì)少量DNA污染敏感的下游應(yīng)用，如定量real-time RT-PCR和RNA-Seq。純化得到的RNA還可用于其他應(yīng)用。
RNeasy Plus Micro Kit適用于小樣本，包括：
激光顯微切割冰凍切片
細(xì)針穿刺
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