ELISA中常見問題及解決方法

    ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

下面分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法

1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

 2 加樣 可能原因：

 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；

 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；

 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。

 解決辦法：

 1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

 2） 加樣后及時放入孵箱。

 3） 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

 4） 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

 5） 標(biāo)本較多時，請分批操作。

 3 孵育 可能原因：

 1） 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；

 2） 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。 

解決辦法：

 1） 貼封片或加蓋；

 2） 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。

4 洗板 可能原因：

 1） 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。

 2） 采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。

 3） 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 

解決辦法：

 1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；

 2） 合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。

5 顯色 可能原因： 

1） 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；

 2） 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

 解決辦法：

 1） 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；

 2） 加樣時保持顯色劑不外流；

 3） A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 

6 終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 7 讀板 如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸（次氯酸鈣）; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。

    在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。

elisa試劑盒