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類風(fēng)濕因測定

時(shí)間：2011/11/19閱讀：640
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類風(fēng)濕因子（RF）是在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）病人血清中發(fā)現(xiàn)，是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體，主要存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液中，它是一種抗變性IgG的抗體，屬IgM型。可與IgGFc段結(jié)合。RA病人和約50%的健康人體內(nèi)都存在有產(chǎn)生RF的B細(xì)胞克隆，在變性IgG（或與抗原結(jié)合的IgG）或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。健康人產(chǎn)生RF的細(xì)胞克隆較少，且單核細(xì)胞分泌的可溶性因子可抑制RF的產(chǎn)生，故一般不易測出。RF主要為IgM類自身抗體，但也有IgG類、IgA類、IgD類和IgE類。各類RF臨床意義有所不同。測定IgG、IgA、IgM類RF通常用ELISA間接法，即用熱凝集兔IgG包被反應(yīng)板微孔，加入檢樣后，再分別加抗人IgG、IgA、IgM酶標(biāo)記抗體，使反應(yīng)后再與底物呈色。為防止各Ig類別RF相互干擾，酶標(biāo)記抗體使用標(biāo)記的抗體F（ab’）2片段。
一、原理：
將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，這種致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時(shí)，即發(fā)生肉眼可見的凝集，此稱膠乳凝集試驗(yàn)。
在用熱凝集變性IgG包被聚苯乙烯反應(yīng)板的微孔中，加入待測血清，如有RF存在，則相互結(jié)合，隨后再加入酶標(biāo)記熱凝集變性的IgG與之反應(yīng)，在加入底物后即可顯色。根據(jù)顯色程度可判斷有無RF存在及其水平，此為雙抗原夾心ELISA法。
二、膠乳凝集試驗(yàn)：
RF是一種主要發(fā)生于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)的抗人變性IgG抗體，可與IgG的Fc段結(jié)合。將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，此致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時(shí)，即可發(fā)生肉眼可見的凝集。
三、操作：
1、56℃30分鐘滅活，（滅活C1q以阻止假陽性凝集）。將待測血清用0.1mol/L PH8.2*緩沖鹽水作1：20稀釋（生理鹽水1ml中加血清0.05ml）。
2、取此稀釋血清1滴（約0.05ml），加于黑色方格玻片的方格內(nèi)，加乳膠RF試劑1滴，立即搖動(dòng)反應(yīng)板3分鐘，使其充分混勻后，于直射光下觀察。每次試驗(yàn)均設(shè)陽性與陰性對照。
四、參考值：
正常人1：20稀釋血清為陰性。
五、結(jié)果判斷：
膠乳凝集試驗(yàn)正常人多為陰性反應(yīng)，如3分鐘內(nèi)出現(xiàn)顯凝集者為陽性。陽性反應(yīng)的標(biāo)本應(yīng)將血清進(jìn)行倍比稀釋測定滴度。ELISA法可根據(jù)顯色程度，與陽性和陰性對照參比，作出陽性或陰性的判斷。

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