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類風(fēng)濕因測定

時(shí)間:2011/11/19閱讀:640
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類風(fēng)濕因子(RF)是在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)病人血清中發(fā)現(xiàn),是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體,主要存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液中,它是一種抗變性IgG的抗體,屬IgM型。可與IgGFc段結(jié)合。RA病人和約50%的健康人體內(nèi)都存在有產(chǎn)生RF的B細(xì)胞克隆,在變性IgG(或與抗原結(jié)合的IgG)或EB病毒直接作用下,可大量合成RF。健康人產(chǎn)生RF的細(xì)胞克隆較少,且單核細(xì)胞分泌的可溶性因子可抑制RF的產(chǎn)生,故一般不易測出。RF主要為IgM類自身抗體,但也有IgG類、IgA類、IgD類和IgE類。各類RF臨床意義有所不同。測定IgG、IgA、IgM類RF通常用ELISA間接法,即用熱凝集兔IgG包被反應(yīng)板微孔,加入檢樣后,再分別加抗人IgG、IgA、IgM酶標(biāo)記抗體,使反應(yīng)后再與底物呈色。為防止各Ig類別RF相互干擾,酶標(biāo)記抗體使用標(biāo)記的抗體F(ab’)2片段。
一、原理:
將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上,這種致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時(shí),即發(fā)生肉眼可見的凝集,此稱膠乳凝集試驗(yàn)。
在用熱凝集變性IgG包被聚苯乙烯反應(yīng)板的微孔中,加入待測血清,如有RF存在,則相互結(jié)合,隨后再加入酶標(biāo)記熱凝集變性的IgG與之反應(yīng),在加入底物后即可顯色。根據(jù)顯色程度可判斷有無RF存在及其水平,此為雙抗原夾心ELISA法。
二、膠乳凝集試驗(yàn):
RF是一種主要發(fā)生于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)的抗人變性IgG抗體,可與IgG的Fc段結(jié)合。將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上,此致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時(shí),即可發(fā)生肉眼可見的凝集。
三、操作:
1、56℃30分鐘滅活,(滅活C1q以阻止假陽性凝集)。將待測血清用0.1mol/L PH8.2*緩沖鹽水作1:20稀釋(生理鹽水1ml中加血清0.05ml)。
2、取此稀釋血清1滴(約0.05ml),加于黑色方格玻片的方格內(nèi),加乳膠RF試劑1滴,立即搖動(dòng)反應(yīng)板3分鐘,使其充分混勻后,于直射光下觀察。每次試驗(yàn)均設(shè)陽性與陰性對照。
四、參考值:
正常人1:20稀釋血清為陰性。
五、結(jié)果判斷:
膠乳凝集試驗(yàn)正常人多為陰性反應(yīng),如3分鐘內(nèi)出現(xiàn)顯凝集者為陽性。陽性反應(yīng)的標(biāo)本應(yīng)將血清進(jìn)行倍比稀釋測定滴度。ELISA法可根據(jù)顯色程度,與陽性和陰性對照參比,作出陽性或陰性的判斷。

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