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進口elisa試劑盒抑制差減雜交技術(shù)原理抑制差減雜交技術(shù)(SSH)是由Diatchenko等建立的以抑制性PCR和DNA差減雜交方法相結(jié)合的方法。其依據(jù)的主要技術(shù)有兩點:(1)消減雜交;(2)抑制PCR。經(jīng)抑制差減雜交后的cDNA群體不僅富集了差異表達基因(目的基因),而且目的基因間豐度的差異經(jīng)過均等化作用已基本消除,使消減后的cDNA群體為豐度一致的目的基因群體。
進口elisa試劑盒抽提兩種不同來源組織的mRNA(tester和driver),反轉(zhuǎn)錄成 cDNA,用4堿基識別酶(RsaI)或HaeIII酶切兩種cDNA產(chǎn)生平端片段;將testerc DNA分成均等的兩份,分別接上dapter1和adapter2兩種接頭,并與過量的經(jīng)RsaI消化的driver樣本變性后退火雜交。*次雜交后有4種產(chǎn)物:a是單鏈testercDNA;b是自身退火的testercDNA雙鏈;c是tester和driver的異源雙鏈;d是drivercDNA。
根據(jù)復性動力學原理,豐度高的單鏈cDNA退火時產(chǎn)生同源雜交速度快于豐度低的單鏈cDNA,因此*次雜交使得豐度有差別的cDNA的單鏈分子的相對含量趨向一致。混合兩份雜交樣品,同時加入新的變性driver cDNA 進行第二次消減雜交。雜交*后補平末端,加入合適引物(即adapter1和adapter2的部分特異序列)進行PCR擴增,只有含不同接頭的雙鏈DNA分子(e)才可進行指數(shù)擴增,擴增產(chǎn)物即為目的片段。進口elisa試劑盒利用adapter上的酶切位點可進行克隆、測序等。
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