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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第2年

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非特異性染色的原因

時(shí)間:2015/8/12閱讀:238
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一、非特異性染色的識(shí)別

常出現(xiàn)在組織邊緣、膠原纖維及血漿滲出處,壞死組織及固定不良的組織中心處。表現(xiàn)為彌漫性,均勻性的背景染色。也可以是隨機(jī)分布的陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物點(diǎn)、團(tuán)或塊狀。抗體

二、非特異性染色的原因

1. Ig與Fc受體結(jié)合

多見(jiàn)于冰凍切片(特別是淋巴造血組織,淋巴細(xì)胞,單核細(xì)胞,組織細(xì)胞表面多),主要是和二抗反應(yīng),因?yàn)橐豢挂话阆♂尪染^大,因此Fc受體的干擾基本不存在。由于福爾馬林固定破壞了大部分的Fc受體,所以石蠟切片不多見(jiàn)。

避免方法:

(1)用以二抗相同種族的正常血清封閉切片;

(2)用不含F(xiàn)c段的抗體,但價(jià)格貴。(V區(qū),C1區(qū)不含F(xiàn)c段,用Pepsin消化)

2. 靜電吸附

抗體是一種帶負(fù)電荷的球蛋白,容易和帶正電荷的組織相結(jié)合,如膠原纖維。

避免方法:

(1)盡量稀釋一抗;

(2)降低抗體的電荷,如用2.5%NaCl,0.05mTBS代替PBS;

(3)用去垢劑如triton-100,Tween-20等處理切片。

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