大鼠黃體生成素（LH）試劑盒定量檢測
　　
　　本產(chǎn)品僅供研究使用
　　
　　【用途】定量檢測大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中黃體生成素（LH）的含量。
　　
　　【檢測原理】
　　
　　本大鼠黃體生成素LH試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被大鼠黃體生成素（LH）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中大鼠黃體生成素（LH）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中大鼠黃體生成素（LH）含量。
　　
　　【操作步驟】
　　
　　1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
　　
　　2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
　　
　　3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加*40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對(duì)照孔不加。
　　
　　4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
　　
　　5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。
　　
　　6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。
　　
　　7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
　　
　　8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。
　　
　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。
　　
　　10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
　　
　　11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
　　
　　12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
　　
　　【樣本要求】
　　
　　1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
　　
　　2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
　　
　　3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。
　　
　　【注意事項(xiàng)】
　　
　　1、大鼠黃體生成素LH實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
　　
　　2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
　　
　　3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
　　
　　4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
　　
　　5、本試劑盒定量范圍為75-2400ng/L，超過此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（75-2400ng/L范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
　　
　　6、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間。
　　
　　7、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、*和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。
　　
　　8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用。
　　
　　9、底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。
　　
　　【檢測范圍】75ng/L–2400ng/L
　　
　　【規(guī)格】96人份/盒
　　
　　【貯藏】2-8℃，避光防潮保存。
　　
　　【有效期】6個(gè)月