培養(yǎng)基EB細(xì)胞體外分化胚狀體形成的特點(diǎn)

使用細(xì)菌培養(yǎng)基皿去除LIF后胚狀體的形成需要4天。

　　1．分散純化細(xì)胞（參見(jiàn)上面的細(xì)胞傳代部分）

　　2．純化2小時(shí)后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有ES培養(yǎng)基的50ml Falcon管中，計(jì)數(shù)細(xì)胞取適量體積放入15ml管中離心3分鐘。

　　3．用2mlEB培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，吹打至少10次制成單細(xì)胞懸液

　　4．一個(gè)15cm的細(xì)菌培養(yǎng)皿接種4～5×106個(gè)細(xì)胞（1個(gè)*融合的組織培養(yǎng)皿通常足以接種4個(gè)同樣規(guī)格的細(xì)菌培養(yǎng)皿）。

Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857)  磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體α/β抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.1ml
Anti-PDGF Receptor beta/PDGF-R-B  血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009)  磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021)  磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr740)  磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751)  磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771)  磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     0.1ml

　　5．2天后更換培養(yǎng)基

　　將胚狀體轉(zhuǎn)入錐形管中放置3～5分鐘使細(xì)胞沉降。棄去上清，將細(xì)胞重懸于新鮮培養(yǎng)基并接種在新的細(xì)菌培養(yǎng)皿中。

　　6．用EB培養(yǎng)基培養(yǎng)的第4天將細(xì)胞轉(zhuǎn)入沒(méi)有包被的組織培養(yǎng)皿中（這即是細(xì)胞的移植步驟）。1個(gè)組織培養(yǎng)皿之中放置1個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)皿，在進(jìn)行第3步之前一天將胚狀體黏附在同樣規(guī)格的培養(yǎng)板上。

　　形成胚狀體需要4天時(shí)間。在EB培養(yǎng)基中再培養(yǎng)1天使胚狀體粘附在組織培養(yǎng)皿的表面。這一天被認(rèn)為是第2步和第3步的分界。