圖像流式細(xì)胞儀——流式細(xì)胞術(shù)的突破
ImageStream是一種臺式多譜段成像流式細(xì)胞儀(Multispectral Imaging Flow Cytometry),能夠同時采集6個檢測通道中的細(xì)胞圖像。它將流式細(xì)胞檢測與熒光顯微成像結(jié)合于一身,既能提供細(xì)胞群的統(tǒng)計數(shù)據(jù),又可以獲得單個細(xì)胞的圖像,從而提供細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞信號分布的信息。
細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn)中,常用的兩種方法為顯微成像觀測和流式細(xì)胞術(shù);但是幾乎所有的用戶都會為顯微成像觀測法分析細(xì)胞數(shù)量太有限、統(tǒng)計學(xué)分析非常繁瑣以及流式細(xì)胞術(shù)無法觀測細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu),無法定位熒光信號到特定部位而煩惱,但是從現(xiàn)在起,您大可不必為此煩惱了,位于美國華盛頓州西雅圖的Amnis公司生產(chǎn)的ImageStream 100很好地解決了這一問題,它將流式多色檢測技術(shù)和熒光顯微鏡圖像顯示技術(shù)集中在一個平臺上,提供了全新的細(xì)胞分析方法。
與傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀很類似,ImageStream也是由液流系統(tǒng),光學(xué)系統(tǒng)和電子系統(tǒng)等三大部分組成。液流系統(tǒng)將樣本細(xì)胞懸液和系統(tǒng)鞘液注入流動室中,使細(xì)胞在鞘液流的約束下聚焦在液流的中心,逐個流過檢測窗口。光學(xué)系統(tǒng)中光源照射通過檢測窗口的細(xì)胞,從而產(chǎn)生光信號。光源分為兩種,其一是用于產(chǎn)生明場細(xì)胞圖像的鹵燈(Brightfield Illuminator),另一種是用于產(chǎn)生熒光細(xì)胞圖像的激光器。光源照射細(xì)胞產(chǎn)生的光信號被具有很大數(shù)值孔徑(NA:0.75)的物鏡收集,然后通過光路系統(tǒng)傳遞到由二向色鏡構(gòu)成的濾光片堆棧(Dichroic Filter Stack),光信號在這里被分成不同波段投射到一個六通道冷CCD上,產(chǎn)生一個明場細(xì)胞圖像,一個暗場細(xì)胞圖像(Side Scatter,SSC)及四個不同熒光通道的細(xì)胞圖像。ImageStream的光路系統(tǒng)能夠自動調(diào)整焦距,并實(shí)時測定細(xì)胞運(yùn)動速度,而其冷CCD采用時間延遲積分方式(Time Delay Integration,TDI)進(jìn)行信號采集,上述這些手段保證了系統(tǒng)采集到的細(xì)胞圖像的質(zhì)量。
ImageStream系統(tǒng)還配有功能強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析軟件IDEAS,可以對每個細(xì)胞分析超過500種量化參數(shù)。這些參數(shù)不僅包括細(xì)胞整體的散射光和熒光信號強(qiáng)度,還包括對細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞結(jié)構(gòu)及亞細(xì)胞信號分布的分析。通過在細(xì)胞群體中對這些參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計,分析軟件可以生成細(xì)胞群體的散點(diǎn)圖和柱狀圖,而這些統(tǒng)計數(shù)據(jù)與細(xì)胞圖像是*整合的,比如點(diǎn)擊散點(diǎn)圖上的點(diǎn),就可以直觀的看到這個點(diǎn)代表的細(xì)胞的圖像。另外,使用者還能夠根據(jù)自身研究的特殊需要,進(jìn)行自定義參數(shù)的設(shè)定,進(jìn)行更深入的分析。
ImageStream圖像流式細(xì)胞儀的應(yīng)用范圍十分廣泛,除了能夠完成傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀能夠完成的工作,它還能進(jìn)行亞細(xì)胞定位、細(xì)胞周期、高通量FISH分析、分子轉(zhuǎn)運(yùn)示蹤、細(xì)胞內(nèi)吞等諸多傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀不能完成的研究工作。