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技術(shù)文章

培養(yǎng)基的靈敏度測(cè)試方法介紹

閱讀:339發(fā)布時(shí)間:2011-7-29

 

1.用于菌數(shù)計(jì)數(shù)的半固體瓊脂培養(yǎng)基促菌生長(靈敏度)檢查的方法:對(duì)每個(gè)不同批號(hào)的脫水培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行靈敏度檢查(促菌生長檢查)。取預(yù)先制備好的瓊脂培養(yǎng)基平皿3~5個(gè),用表面涂布法每塊平板表面接種30~100個(gè)試驗(yàn)菌,同時(shí)用已知質(zhì)量保證的同型號(hào)培養(yǎng)基平皿3~5個(gè)(如較的如MERCK,DIFICOL產(chǎn)品)做對(duì)照試驗(yàn),待培養(yǎng)基表面的菌液被瓊脂培養(yǎng)基吸干或風(fēng)干后,將培養(yǎng)皿倒置于培養(yǎng)箱的使用溫度下培養(yǎng)48~72小時(shí),(也可采用澆碟法進(jìn)行)取出培養(yǎng)后的平皿點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。樣品培養(yǎng)基上的微生物數(shù)量應(yīng)不得低于對(duì)照培養(yǎng)基上微生物生長數(shù)量的70%。否則,需重新檢查,或該培養(yǎng)基被視為不符合促生長要求。
2.用于控制菌檢查的富集培養(yǎng)基的促菌生長(靈敏度)檢查的方法:對(duì)每個(gè)不同批號(hào)的脫水培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行靈敏度檢查。每100ml培養(yǎng)基內(nèi)分別接入試驗(yàn)菌小于100cfu,每個(gè)菌種接種兩瓶培養(yǎng)基,將接過種的培養(yǎng)基置于條件下培養(yǎng)。應(yīng)在16~18小時(shí)后可明顯觀察到培養(yǎng)基內(nèi)有微生物生長,則證明此培養(yǎng)基合格。
原則上無論是采用脫水培養(yǎng)基還是按相關(guān)處方配制的培養(yǎng)基,一旦制成成品培養(yǎng)基,則應(yīng)對(duì)每個(gè)配制批號(hào)培養(yǎng)基進(jìn)行促菌生長(靈敏度檢查)試驗(yàn),以考察培養(yǎng)基的質(zhì)量。按脫水培養(yǎng)基的生產(chǎn)批號(hào)做靈敏度檢查是基于培養(yǎng)基的滅菌程序已經(jīng)經(jīng)過驗(yàn)證。
如果實(shí)驗(yàn)室使用的是商購的成品培養(yǎng)基,供應(yīng)商應(yīng)隨培養(yǎng)基提供相應(yīng)批次的培養(yǎng)基質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告,報(bào)告包括培養(yǎng)基的PH值、無菌檢查結(jié)果和促菌生長(靈敏度)試驗(yàn)結(jié)果等項(xiàng)目。建議在使用某一新的成品培養(yǎng)基(新供應(yīng)商或新培養(yǎng)基品種)時(shí),應(yīng)至少考察三個(gè)不同批次的培養(yǎng)基質(zhì)量,只有三批質(zhì)量均合格方可使用該培養(yǎng)基。微生物限度檢查用成品培養(yǎng)基一旦初試確認(rèn)合格后,可審查供應(yīng)商的質(zhì)檢報(bào)告,而不必每批再作無菌檢查和靈敏度檢查,但半年應(yīng)至少檢查一次,以復(fù)核其質(zhì)量。用于無菌檢查試驗(yàn)的每批培養(yǎng)基,均必須按規(guī)定進(jìn)行靈敏度檢查試驗(yàn),此規(guī)定同樣適用于實(shí)驗(yàn)室自行配制的培養(yǎng)基。。
建議在正式使用前即應(yīng)完成對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量檢查。如果在進(jìn)行靈敏度試驗(yàn)的同時(shí),也使用該培養(yǎng)基進(jìn)行樣品檢查,那么,一旦培養(yǎng)基的無菌性或靈明度不符合規(guī)定,則檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)無效。無論這些質(zhì)量控制檢查試驗(yàn)何時(shí)完成,實(shí)驗(yàn)室都必須在相關(guān)產(chǎn)品放行之前或檢驗(yàn)報(bào)告發(fā)出之前,對(duì)所用培養(yǎng)基的無菌性及靈敏度試驗(yàn)資料的完整性和合格予以確認(rèn)。
靈敏度(促生長)檢查試驗(yàn)用菌懸液,可用標(biāo)準(zhǔn)菌種制得,也可向具備適當(dāng)資質(zhì)的供應(yīng)商購買。目前市場(chǎng)上的商用產(chǎn)品,如REMEL公司的培養(yǎng)基質(zhì)量Quanti-cultR檢查用菌種,小瓶內(nèi)每片薄膜上含有10~100CFU。此類產(chǎn)品使用簡單,但操作者需嚴(yán)格遵守供應(yīng)商的使用要求。另外,盡管所購試菌種均附有質(zhì)量證書,正式使用前,仍必須用傾注平皿法或鋪表面法等標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法對(duì)菌懸液的微生物數(shù)量進(jìn)行復(fù)核確認(rèn)。

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