1.30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之,補(bǔ)加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。
【注意】丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應(yīng)戴手套和面具??烧J(rèn)為聚丙烯酰胺無毒,但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作,因?yàn)樗€可能會含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然后用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。
2.40%丙烯酰胺
【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為1L。
【注意】見上述配制30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。
3.*溶液
【配制方法】把20mg*溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀釋貯存液,用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。*(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21,900,故而1mg/ml的*溶液在440nm處的吸光值為0.182,*的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中,保存于-20℃。
【注意】*是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作,而不能在開放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行,謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。
藥廠提供的作治療用途的*制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定*的濃度,這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。
4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0,用蒸餾水定容1ml,分裝成小份保存于-70℃
5.10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。
6.10%過硫酸銨溶液
【配制方法】把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中,該溶液可在4℃保存數(shù)周。
7.BCIP溶液
【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
8.2×BES緩沖鹽溶液
【配制方法】用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室溫下用HCl調(diào)節(jié) 該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成小份,保存于-20℃。
9.1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2?6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20℃。
【注意】制備感受態(tài)細(xì)胞時,取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml,用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,然后驟冷至0℃。
10.2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2?6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。
11.1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液
【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。
【注意】DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理。
12.脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
【配制方法】把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調(diào)節(jié) 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測),把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當(dāng)稀釋,在給出的波長下讀取光密度計(jì)算出每種dNTP的實(shí)際濃度,然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP,分裝成小份貯存于-70℃。
13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?2H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調(diào)節(jié) 溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒)然后定容至1L,分裝后高壓滅菌備用。
【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調(diào)至接近8.0,才能*溶解。
14.溴化乙錠(10mg/ml溶液)
【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數(shù)小時以確保其*溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中,保存于室溫。
【注意】小心:溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時務(wù)必戴上手套,稱量染料時要戴面罩。
15.2×HEPES緩沖鹽溶液
【配制方法】用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH調(diào)節(jié) pH值至7.05,再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成5ml小份,貯存于-20℃。