因病理組織切片常規(guī)蘇木紫伊紅染色(下簡稱常規(guī)染色)尚能辨認(rèn)霉菌,所以組織切片的霉菌染色體未得到應(yīng)有的重視。現(xiàn)將筆者過去霉菌感染的組織切片,進(jìn)行了6種霉菌染色比較,結(jié)果如下。
1 材料與方法
從過去霉菌感染或可疑霉菌感染的19例尸檢和5例活檢標(biāo)本中(主要是念珠菌\曲霉菌及毛霉菌感染,也有個(gè)別的放線菌及隱球菌感染),選出有關(guān)的組織蠟塊,重作厚4μm切片,脫蠟后分別進(jìn)行革蘭染色,PAS染色,Grialey氏醛品紅-PAS法染色(1.2.3),Grocott-Gomori二氏**法染色(4.5),Mallory氏纖維蛋白改良法(2)及常規(guī)染色。
PAS染色胳改用0.2%淡綠代替蘇木紫作對比染色。Grialey氏醛品紅-PAS染色法,用1%高碘酸氧化30min代替5%鉻酸氧化。
Grocott-Gomori二氏烏托品*染色法,亦用1%高碘酸氧化30min代替5%鉻酸氧化,并以0.2%淡綠代替蘇木紫作對比染色。
2 結(jié)果
革蘭染色切片內(nèi),念珠菌為藍(lán)色(革蘭陽性),曲霉菌和毛霉菌則為紅色(革蘭陰性),但毛霉菌著色較淺,結(jié)構(gòu)不清。因系中性紅對比染色,細(xì)胞核亦染為紅色,與霉菌孢子鑒別有困難.放線菌及隱球菌均未著色。
PAS法染色,以淡綠作對比染色較蘇木紫為佳,霉菌均顯紅-紫色菌叢中隔及孢子均明顯可見。
Grialey氏醛品紅-PAS法染色,霉菌絲及孢子均染成程度不同的紅-紫紅色。但背景亦為淺紫色,對比不鮮明,但霉菌著色深,鏡下觀察仍較常規(guī)紫色者為優(yōu)。
Grocott-Gomori二氏**染色法,霉菌均染成黑色,當(dāng)染色深淺適當(dāng)時(shí),切片中菌絲的壁,孢子的包膜及菌絲中隔均呈深黑色,菌絲內(nèi)部顯暗褐色,結(jié)構(gòu)清楚,改用淡綠對比染色,較蘇木紫伊紅染色為鮮明,適合觀察和攝影。
Mallory氏纖維蛋白改良法,霉菌染為藍(lán)-深紫色,背景是蘇木紫及伊紅染色,因此近似常規(guī)染色,只是霉菌較深。
在常規(guī)染色中,霉菌的孢子及菌絲一般均染成淺藍(lán)色,較細(xì)胞核為淺,因?yàn)槭撬{(lán)色,有時(shí)孢子難以與細(xì)胞核或已破碎的細(xì)胞核鑒別,而菌絲也長不能和已擠壓成絲狀的細(xì)胞核鑒別。所以,常規(guī)染色和其他霉菌染色比較,發(fā)現(xiàn)常規(guī)染色存在以下問題:(1)每張切片中所見到霉菌的數(shù)量遠(yuǎn)不及其他霉菌染色多;(2)在常規(guī)染色中,有3例未找到霉菌的切片,做了霉菌染色即能證實(shí)有霉菌存在,如1例皮膚燒傷的病例,臨床懷疑有霉菌感染,常規(guī)染色不能找到霉菌,而霉菌染色證實(shí)有毛霉菌感染。1例患者用了大量的激素及抗生素后死亡,腎臟有一膿腫,內(nèi)有多核巨細(xì)胞,不象化膿性細(xì)菌感染。曾疑為霉菌所致,常規(guī)染色未能找到霉菌,經(jīng)霉菌染色后,證實(shí)膿腫內(nèi)有念珠菌。存在另1例致死性中線肉芽腫患者,用了激素等治療后,肺內(nèi)有念珠菌\曲霉菌及毛霉菌混合感染,死于十二指腸降部穿孔,穿孔部有壞死及炎癥,疑為霉菌所致,但切片曾多處會診,均因找不到霉菌而不能肯定.這次做霉菌染色,在穿孔邊緣及壞死區(qū)有少數(shù)念珠菌,肯定是霉菌感染所致的穿孔;(3)常規(guī)染色能見到霉菌數(shù)量少,且易與其他組織結(jié)構(gòu)混淆,造成分類錯誤或遺漏,經(jīng)霉菌染色糾正分類錯誤或遺漏的有7例,多數(shù)是毛霉菌與念珠菌混淆。有1例肺內(nèi)常規(guī)染色僅見到多數(shù)孢子,未見菌絲,當(dāng)時(shí)不能分類,只能診斷酵母菌類霉菌感染,經(jīng)霉菌染色后,發(fā)現(xiàn)有菌絲存在,只不過量少而已,而改正為念珠菌感染。
1年后,重新觀察切片時(shí),常規(guī)染色及Grocott-Gomori氏洛托品*染色均無褪色,其他染色均有不同程度的褪色。淡綠對比染色幾乎*褪色。