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當(dāng)前位置:上海博耀生物科技有限公司>>抗體>>一抗>> KT0848Anti-Cyr61/IGFBP10/CCN1  富半胱氨酸肝素結(jié)合蛋白61抗體
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產(chǎn)品型號KT0848
品 牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2018-09-12 09:45:17瀏覽次數(shù):569次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 環(huán)保在線Anti-Cyr61/IGFBP10/CCN1 富半胱氨酸肝素結(jié)合蛋白61抗體
一抗
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多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟:
1、制備抗原。
2、選擇實(shí)驗(yàn)動物。
3、動物免疫。
4、試取血進(jìn)行測試,看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫,殺死實(shí)驗(yàn)動物,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
蛋白質(zhì)與多肽的:
多肽:通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,道爾頓),能透過半透膜,不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽;由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì):生物體中廣泛存在的一類生物大分子,由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈,再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物。
就是:都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別:
蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡寫為:C、H、O、N等元素→氨基酸→多肽(肽鏈)→蛋白質(zhì)。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個(gè)層次,區(qū)別如下:
?、俣嚯暮偷鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級結(jié)構(gòu)形式,而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的,一個(gè)蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成(如高等動物的細(xì)胞色素c是由104個(gè)氨基酸殘基的一條肽鏈組成),也可由多條肽鏈通過一定的化學(xué)鍵(肯定不是肽鍵,如二硫鍵、氫鍵等)連接而成(如胰島素由2條肽鏈組成、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等)。
②多肽與蛋白質(zhì)的功能有差異。多肽往往是無生物活性,而蛋白質(zhì)是具有生物活性的。多肽一般無活性(如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽),少數(shù)有活性(如抗利尿激素就是多肽類激素),與蛋白質(zhì)相比,多肽的分子量較小,沒有空間結(jié)構(gòu),一般無活性;蛋白質(zhì)的分子量較大,有空間結(jié)構(gòu),有活性(變性后活性下降或消失,活性消失叫做失活)
因此,一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì)。
多肽合成:
是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過程,固相合成順序一般從C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來,經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn),從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固
單克隆抗體:
?。╩onoclonal antibody,McAb)克隆選擇學(xué)說:淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體,一種細(xì)胞帶一種受體,進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個(gè)別淋巴細(xì)胞,使之活化,增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群,分泌同樣的抗體。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi),在機(jī)體中就會誘導(dǎo)出針對不同抗原決定簇的多種抗體,如果要把這些抗體一一分開,用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的。1975年科勒(Kohler)和米爾斯坦(Milstein)將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合,培養(yǎng)出既能迅速生長無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。從而獲得針對某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。1995年,Katherine Knight博士在美國芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞(Plasmacytoma),開創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù)。與鼠單抗相比,兔單抗具有:首先,兔抗血清通常含有高親和力抗體,可以比鼠抗血清識別更多種類的表位;其次,兔單克隆抗體能夠識別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原;第三,由于兔脾臟較大,可以更多進(jìn)行的融合試驗(yàn),使得高通量篩選融合成
抗體的功能:
抗體的主要功能是與抗原(包括外來的和自身的)相結(jié)合,從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物、寄生蟲等異物,抗體(antibody)是一種應(yīng)答抗原產(chǎn)生的、可與抗原特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。每種抗體與特定的抗原決定基結(jié)合。這種結(jié)合可以使抗原失活,也可能無效但有時(shí)也會對機(jī)體造成病理性損害,如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產(chǎn)生,對人體可造成危害??贵w的特異性鑒定 :
抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗(yàn)測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在 IC50時(shí)的濃度,并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時(shí),表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0,即該血清的特異性較好。<
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