Anti-ABCG4/FITC

熒光素標(biāo)記抗ABC膜轉(zhuǎn)運蛋白抗體IgG

標(biāo)記抗體（一抗）

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抗體的效價鑒定：
不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體，要求的效價不一。鑒定效價的方法很多，包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法，以資比較。如制備抗抗體的效價，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗來鑒定。
蛋白質(zhì)與多肽的：
多肽：通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽，它們的分子量低于10，000Da（Dalton，道爾頓），能透過半透膜，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀。也有文獻(xiàn)把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽；由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì)。
蛋白質(zhì)：生物體中廣泛存在的一類生物大分子，由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈，經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈，再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物。
就是：都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別：
　　蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡寫為：C、H、O、N等元素→氨基酸→多肽（肽鏈）→蛋白質(zhì)。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個層次，區(qū)別如下：
　　①多肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級結(jié)構(gòu)形式，而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的，一個蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成（如高等動物的細(xì)胞色素c是由104個氨基酸殘基的一條肽鏈組成），也可由多條肽鏈通過一定的化學(xué)鍵（肯定不是肽鍵，如二硫鍵、氫鍵等）連接而成（如胰島素由2條肽鏈組成、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等）。
　?、诙嚯呐c蛋白質(zhì)的功能有差異。多肽往往是無生物活性，而蛋白質(zhì)是具有生物活性的。多肽一般無活性（如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽），少數(shù)有活性（如抗利尿激素就是多肽類激素），與蛋白質(zhì)相比，多肽的分子量較小，沒有空間結(jié)構(gòu)，一般無活性；蛋白質(zhì)的分子量較大，有空間結(jié)構(gòu)，有活性（變性后活性下降或消失，活性消失叫做失活）
　　因此，一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實際上不能稱為蛋白質(zhì)。
多肽合成：
是一個重復(fù)添加氨基酸的過程，固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來，經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術(shù)，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種：固相合成和液相多肽合成。
單克隆抗體：
　?。╩onoclonal antibody，McAb）克隆選擇學(xué)說：淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體，一種細(xì)胞帶一種受體，進(jìn)入機體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個別淋巴細(xì)胞，使之活化，增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群，分泌同樣的抗體。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi)，在機體中就會誘導(dǎo)出針對不同抗原決定簇的多種抗體，如果要把這些抗體一一分開，用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的。1975年科勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，培養(yǎng)出既能迅速生長無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。從而獲得針對某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。1995年，Katherine Knight博士在美國芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞（Plasmacytoma），開創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù)。與鼠單抗相比，兔單抗具有：首先，兔抗血清通常含有高親和力抗體，可以比鼠抗血清識別更多種類的表位；其次，兔單克隆抗體能夠識別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原；第三，由于兔脾臟較大，可以更多進(jìn)行的融合試驗，使得高通量篩選融合成為可能。
抗體的親和力 ：
是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示，K的單位是L/mol，通常K的范圍在 108 ～1010 /mol，也有多達(dá) 1014 /mol?？贵w親和力的測定對抗體的篩選，確定抗體的用途，驗證抗體的均一性等均有重要意義。
生物活性：
　　（1）特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞，通常需要補體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用。 　
?。?）激活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。
　?。?）結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
　?。?）可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A（IgA）可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
　?。?）具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
　?。?）抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
　?。?）通過與細(xì)胞Fc受體結(jié)合發(fā)揮多種生物效應(yīng) 　?、僬{(diào)理作用 　　IgG、IgM的Fc段與吞噬細(xì)胞表面的FcγR、FcμR結(jié)合，增強其吞噬能力，通常將抗體促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬功能的作用稱為抗體的調(diào)理作用 （opsonization）。 　?、诎l(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。