為了提高ELISA的敏感性,在ELISA中人們采用不同的放大機(jī)制,建立在ELISA的幾類放大系統(tǒng)?,F(xiàn)在向讀者介紹幾個(gè)比較重要的ELISA放大系統(tǒng)。
一,生物-親和素系統(tǒng)(Biotin-AvidinSystem,簡稱BAS)
*與抗*之間具有*的親和力,可以縮短反應(yīng)時(shí)間,達(dá)到快速檢測的目的。另外,抗體和酶的*標(biāo)記率高,又不影響其活性,每個(gè)親和素分子能結(jié)合4個(gè)*,每個(gè)*能標(biāo)記大量酶分子,使得ELISA的敏感性大大提高,*與親和素的結(jié)合也極為穩(wěn)定,不會在洗滌過程中脫落。BA-ELISA是在常規(guī)ELISA的基礎(chǔ)上,結(jié)全*(Biotin)與親和素(Avidin)的高度放大作用,形成的一種檢測方法。BA-ELISA分為:
1,LAB法即酶聯(lián)親和素-*標(biāo)記法(Labeledavidin-biotin,簡稱LAB)。用辣根過氧化物酶直接標(biāo)記親和素,用*標(biāo)記第二抗體。
2,ABC法即酶聯(lián)親和素-*-過氧化物酶復(fù)合物法(Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex,簡稱ABC)。如用鏈霉親和素(Streptavidin),則形成鏈霉親和素-酶聯(lián)*復(fù)合物(Streptavidin-Biotin-PeroxidaesComplex,簡稱SABC)。在ABC法中,用*標(biāo)記第二抗體,又用*標(biāo)記過氧化物酶。在使用前30min,親和素與酶聯(lián)*以1:1的比例混勻。1個(gè)親和素分子結(jié)合3個(gè)*分子,親和素剩下的1個(gè)結(jié)合點(diǎn)與標(biāo)記第二抗體的*結(jié)合,親和素起橋聯(lián)作用。ABC法比PAP(Peroxidase-antiperoxidasetech-nique)法敏感幾十倍。
3,BAB法即酶聯(lián)親和素-*橋法(Bridgedavidin-biotin,簡稱BAB)。用游離親和素(或鏈霉親和素)作為橋聯(lián)劑,將*標(biāo)記后開成的復(fù)合物與酶標(biāo)記*連結(jié)起來,然后進(jìn)行樣品的檢測。由于標(biāo)記抗體分子上連有多個(gè)*,因此,zui終形成的抗原-*標(biāo)記抗體-親和素-酶標(biāo)*復(fù)合物可積聚大量的酶分子;加入相應(yīng)底物后,產(chǎn)生強(qiáng)烈的酶促反應(yīng),大幅度提高檢測的靈敏度。
二,堿性磷酸酶放大系統(tǒng)
堿性磷酸酶廣大系統(tǒng)包含多種放大機(jī)制:堿性磷酸酶不直接催化底物生成有色產(chǎn)物而是催化生成輔酶I(NAD+),輔酶I激活下一輪氧化還原反應(yīng),輔酶I啟動的反應(yīng)為底物的顏色化學(xué)轉(zhuǎn)變提供條件。在供氫體的作用下,底物氧化/還原發(fā)生顏色變化。
三,微粒放大系統(tǒng)
每個(gè)適當(dāng)?shù)奈⒘1砻婵梢酝瑫r(shí)結(jié)合(或吸附)大量的標(biāo)記酶和抗體分子。在包含微粒放大系統(tǒng)的夾心ELISA法中,微粒通過結(jié)合于其上的第二抗體結(jié)合于*抗體。同時(shí)微粒上又結(jié)合著標(biāo)記酶,其數(shù)量大大多于第二抗體能結(jié)合的標(biāo)記酶,從而得以放大。
四,催化的顯示劑沉積
催化的顯示劑沉積(Catalyzedreporterdeposition,簡稱CARD)。CARD依次使用三套顯示劑:*套顯示劑是聯(lián)在抗體上的HRP,它通過抗體與待測抗原的反應(yīng)結(jié)合于固相表面;第二套顯示劑是標(biāo)有*的*,它受到*顯示劑的氧化催化后沉積于固相表面;第三套顯示劑是標(biāo)在鏈霉親和素(Streptavidin)上的AP,可被固相上的*捕獲,放大效果非常大。
人非甲基化寡核苷酸(NON)ELISA試劑盒
人蛋白Z(ProteinZ)ELISA試劑盒
人蛋白S(ProteinS)ELISA試劑盒
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