人*（Noradrenalin）ELISA試劑盒

1
人*（NE）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用              目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)
液體樣本中*（NE）的含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人*（NE）水平。用純化的人去甲
腎上腺素（NE）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入去甲腎上
腺素（NE），再與 HRP 標記的*（NE）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復
合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的*（NE）呈正相關(guān)。用酶標
儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人*（NE）
濃度。
試劑盒組成：
試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片（48） 2 片（96）
密封袋 1 個 1 個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品：2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/
分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞2
濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分
鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7.  不能檢測含 NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標
準品 100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L，  150ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將 30（48T的 20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的 20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值
大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。3
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，      
在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD          
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋        
倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標        
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值        
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋        
倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。                                
  
                                                                                          
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和 11%
檢測范圍：                                                                                          
100ng/L -2000ng/L                                   
                                                      
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
Human Noradrenalin
RD4
FOR RESEARCH USE ONLY
Drug Names
Generic Name：Human Noradrenalin （NE）ELISA Kit.
Purpose
This kit allows for the determination of NE concentrations in Human
serum, plasma, and other biological fluids.
Principle of the assay
The kit assay Human NE level in the sample，use Purified Human NE
antibody  to  coat  microtiter  plate  wells,  make  solid-phase  antibody,
then add NE to wells, Combined NE antibody which With HRP labeled ,
become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing
Compley, Add  TMB  substrate  solution,TMB  substrate  becomes  blue
color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition
of  a  sulphuric  acid  solution  and  the  color  change  is  measured
spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration
of NE in the samples  is then determined by comparing the O.D. of the
samples to the standard curve.5
Materials provided with the kit
Materials provided
with the kit
48determination
s
96 determinations
Stora
ge
User manual 1 1
Closure plate
membrane
2 2
Sealed bags 1 1
Microelisa stripplate 1 1 2-8℃
Standard：2700ng/L 0.5ml×1 bottle 0.5ml×1 bottle 2-8℃
Standard diluent 1.5ml×1 bottle 1.5ml×1 bottle 2-8℃
HRP-Conjugate
reagent
3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃
Sample diluent 3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃
Chromogen
Solution A 3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃
Chromogen
Solution B
3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃
Stop Solution 3ml×1 bottle 6ml×1 bottle 2-8℃
wash    solution
（20ml×20 fold）
×1bottle
（20ml×30 fold）
×1bottle
2-8℃
Specimen requirements
1. serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation
20-min  at  the  speed  of  2000-3000  r.p.m.  remove  supernatant,  If
precipitation appeared, Centrifugal again.
2. plasma-use  suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix
10-20 mins  ,centrifugation  20-min  at  the  speed  of  2000-3000  r.p.m.
remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
3. Urine-collect  sue  a  sterile  container,  centrifugation  20-min  at  the
speed  of  2000-3000  r.p.m.  remove  supernatant,  If  precipitation
appeared,  Centrifugal  again.  The  Operation  of  Hydrothorax  and
cerebrospinal fluid Reference to it.
4. cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a
sterile  container,  centrifugation  20-min  at  the  speed  of  2000-3000
r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell 6
suspension with PBS （PH7.2-7.4） , Cell concentration reached 1 million
/  ml,  repeated  freeze-thaw  cycles,  damage  cells  and  release  of
intracellular  components,  centrifugation  20-min  at  the  speed  of
2000-3000  r.p.m.  remove  supernatant,  If  precipitation  appeared,
Centrifugal again.
5. Tissue  samples-  After  cutting  samples,  check  the  weight,add  PBS
（PH7.2-7.4）, Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at
2-8℃ after  melting,add  PBS（PH7.4）,  Homogenized  by  hand  or
Grinders,  centrifugation  20-min at  the  speed  of  2000-3000  r.p.m.
remove supernatant.
6. extract as soon as possible after Specimen collection,and according
to  the  relevant  literature,  and  should  be  experiment  as  soon  as
possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20
℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
7. Can’t  detect  the  sample  which  contain  NaN3,  because  NaN3
inhibits HRP active.
Assay procedure
1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA
plates coated, add  Standard  100μl  to  the  first and  the  second well,
then add Standard dilution 50μl  to  the  first and  the second well, mix;
take out 100μl form the first and the second well then add it to the third
and  the  forth well  separay.  then add Standard dilution 50μl  to  the
third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the
forth well  discard, add  50μl  to  the  fifth and  the  sixth well  ,then add
Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl
from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth
well,  then add  Standard dilution 50μl  to  the  seventh and  the eighth
well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add
to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth 7
and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well
discard（add Sample 50μl to each well after Diluting ,（density: 1800ng/L，
1200ng/L ，600ng/L，300ng/L，  150ng/L）
2.add sample：Set blank wells separay （blank comparison wells don’t
add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is
same）. testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample
well, then add testing sample 10μl （sample final dilution is 5-fold）, add
sample  to  wells  ,  don’t  touch  the  well  wall  as  far  as  possible,  and
Gently mix.
3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate
for 30 min at 37℃.
4.Configurate liquid: 30-fold （or 20-fold）wash solution diluted 30-fold （or
20-fold） with distilled water and reserve.
5.washing：Uncover  Closure  plate membrane,  discard Liquid,  dry  by
swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5
times, dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except
blank well.
7.incubate：Operation with 3.
8.washing：Operation with 5.
9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to
each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃
10.Stop  the  reaction：Add  Stop  Solution50μl  to  each  well,  Stop  the
reaction（the blue color change to yellow color）.
11.assay：take blank well  as  zero  , Read absorbance at  450nm after
Adding Stop Solution and within 15min.
Important notes
1. The  kit  takes  out  from  the  refrigeration  environment  should  be 8
balanced  15-30  minutes  in  the  room  temperature,  ELISA  plates
coated if has not use up after opened, the plate should be stored in
Sealed bag.
2. washing buffer will Crystallization  separation,  it can be heated  the
water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
3. add  Sample with  sampler  Each  step, And  proofread  its  accuracy
frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 mins,
if the number of sample is much , recommend to use Volley .
4. if the testing material content is excessively higher （The sample OD is
bigger  than  the  first  standard well  ）,please  dilute  Sample  （n-fold）,
Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
5. Closure  plate  membrane  only  limits  the  disposable  use,  to  avoid
cross-contamination.
6. The substrate evade the light preservation.
7. Please  according  to  use  instruction  strictly,  The  test  result
determination must take the microtiter plate reader as a standard.
8. All  samples,  washing  buffer  and  each  kind  of  reject  should
according to infective material process.
9. Do not mix reagents with those from other lots.
Calculate
Take  the  standard  density  as  the
horizontal, the OD value for the vertical ,draw
the standard curve on graph paper, Find out
the  corresponding  density  according  to  the
sample  OD  value  by  the  Sample  curve,
multiplied  by  the  dilution  multiple,  or
calculate the straight line regression equation
of  the  standard  curve  with  the  standard
density  and  the OD  value  ,with  the  sample
This chartis for reference only9
Assay range
100ng/L -2000ng/L
Storage and validity
1．Storage：    2-8℃.
2．validity：  six months.