生物通“核心刊物”迎來了新期刊：科學(xué)通報，中國科學(xué)C輯:生命科學(xué)，這兩份期刊均是由*和*共同主辦的，我國學(xué)術(shù)期刊中的，被國內(nèi)外各主要檢索系統(tǒng)收錄，如國內(nèi)的《中國科學(xué)論文與引文數(shù)據(jù)庫》（CSTPCD）、《中國科學(xué)引文數(shù)據(jù)庫》（CSCD）等；美國的SCI、CA、EI，英國的SA，日本的《科技文獻(xiàn)速報》等。目前針對每期的重點內(nèi)容，生物通將展開詳細(xì)推薦，歡迎讀者共同參與…… 
 
生物通報道：來自中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)等處的研究人員利用shRNA與的“睡美人”（sleeping beauty, SB）轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，生成了能抑制口蹄疫病毒3D 基因復(fù)制的山羊，這為研究山羊抑制口蹄疫病毒復(fù)制提供了理論依據(jù)。
口蹄疫（food and mouth disease, FMD）是哺乳動物的一種高度接觸性傳染病, 由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus, FMDV）引起。FMDV屬于小RNA病毒科口蹄疫病毒屬病毒, 為單股正鏈 RNA 病毒, 有 7種血清型, 分別為 O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 和Asia, 每種類型中又有多個亞型, 遺傳變異頻率高, 各型之間幾乎沒有免疫保護(hù)力。FMDV基因組中高度保守區(qū)域有 3D（RNA 聚合酶）, 2B（非結(jié)構(gòu)蛋白, 宿主范圍決定因子）等基因, 針對FMDV 基因組保守序列, 通過RNAi可以解決血清型間不能交叉保護(hù)的問題。
轉(zhuǎn)基因技術(shù)已廣泛應(yīng)用于提高家畜生產(chǎn)性能和抗病育種等方面, 生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物的方法有很多種, 但轉(zhuǎn)基因技術(shù)的效率仍然很低。轉(zhuǎn)座子（transposon）又稱跳躍基因, 是一種可在基因組內(nèi)插入和切離并能改變自身位置的 DNA 序列, “睡美人”轉(zhuǎn)座系統(tǒng)（sleeping beauty, SB）是 Tc1/mariner 轉(zhuǎn)座因子超家族中的一員, 是*個應(yīng)用于高等哺乳動物細(xì)胞相關(guān)研究的轉(zhuǎn)座子, 在脊椎動物中比其他轉(zhuǎn)座子活性高。 SB轉(zhuǎn)座子包括編碼轉(zhuǎn)座酶的基因和末端反向重復(fù)序列（IR/DR）, 轉(zhuǎn)座酶是轉(zhuǎn)座的催化因子, 促進(jìn)轉(zhuǎn)座的發(fā)生, 轉(zhuǎn)制是經(jīng)典的“切割與黏貼”。SB 轉(zhuǎn)座子可以通過生殖細(xì)胞穩(wěn)定地遺傳給后代, 其在基因轉(zhuǎn)移和基因標(biāo)簽等方面都已經(jīng)發(fā)揮了重要作用。在這篇文章中，研究人員通過篩選FMDV 基因組中高度保守區(qū)域的 shRNA, 構(gòu)建含shRNA的SB轉(zhuǎn)座子表達(dá)載體, 采用原核注射法生產(chǎn)抑制 FMDV 基因組中高度保守區(qū)域的轉(zhuǎn)基因山羊。
研究人員對口蹄疫病毒基因（2B, 3D） shRNA 抑制靶點進(jìn)行篩選, 構(gòu)建了 3條含靶基因 shRNA的 pLL3.7表達(dá)載體, 與含靶基因psiCheck2載體（雙熒光素標(biāo)記）共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞, 對合成的shRNA進(jìn)行篩選. 獲得的抑制效果好的3D1shRNA （干擾 3D基因）插入到 SB轉(zhuǎn)座子載體上, 將含 3D1shRNA的 SB轉(zhuǎn)座子與轉(zhuǎn)座酶（2:1, 5:1, 10:1）通過原核顯微注射生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因山羊。出生羔羊進(jìn)行 Southern blot 與整合位點鑒定, 對陽性個體耳成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染含3D基因的pisCheck2載體, 觀察其抑制率. 結(jié)果共獲得了 7 只陽性山羊。SB 轉(zhuǎn)座子與轉(zhuǎn)座酶的比例為 10:1 時, 生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因山羊的效率為21.05%. 陽性個體耳成纖維細(xì)胞對口蹄疫病毒 3D基因有顯著抑制效果。
而且這項研究通過原核顯微注射法, 利用SB 轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因山羊, SB 轉(zhuǎn)座子與轉(zhuǎn)座酶的比例為 10:1 時, 轉(zhuǎn)座的效率zui高?？偠灾@一研究成果針對FMDV基因組中高度保守區(qū)域3D基因設(shè)計shRNA, 結(jié)合的 SB 轉(zhuǎn)座系統(tǒng)與 RNAi 技術(shù), 采用原核注射法制作轉(zhuǎn)基因山羊, 生產(chǎn)出抑制FMDV-3D基因復(fù)制的山羊, 為研究山羊抑制FMDV復(fù)制提供了理論依據(jù)。      來源：生物通