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閱讀:702發(fā)布時間:2012-11-02
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總結(jié)ELISA實驗操作中常見問題有哪些:
1 標(biāo)本及采集、貯運因素:
嚴(yán)重溶血,以 HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性; 混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈;如有 細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng); 標(biāo)本凝固不全,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果; 采血試管洗滌不*、反復(fù)使用易交叉污染; 塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。
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