大鼠兒茶酚胺（CA）ELISA試劑盒說明書

大鼠兒茶酚胺,大鼠兒茶酚胺（CA）ELISA試劑盒原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠兒茶酚胺（CA）單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品 中的 大鼠兒茶酚胺（CA）與單抗結(jié)合，加入*化的抗大鼠兒茶酚胺（CA），形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧 化物酶標(biāo)記的 Streptavidin 與*結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，zui后加終止液硫酸，在 450nm 處測(cè) OD 值，NF-κΒ p65 濃度與 OD 值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中 大鼠兒茶酚胺（CA）濃度。

大鼠elisa試劑盒組成

1、30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2、酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（240 ng/L） 0.5ml×1瓶
3、酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶

大鼠elisa試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1. 2. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA） 、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存 48 小時(shí)； 更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入 0.5ml 蒸餾水混勻，配成 20ng/ml 的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管 8 管，*管 加標(biāo)本稀釋液 900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul。在*管中加入 20ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品 溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul， 移至第二管。 如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋， 從第七管中吸出 500ul 棄去。第八管為空白對(duì)照。 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1:10 倍稀釋（示例：1ml 濃稀釋液+9ml 蒸餾水） 。 洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水） 將 450ul 標(biāo)本稀釋液加入到一支 1.5ml 進(jìn)口聚丙烯管中,再加 10ul 血清或血漿標(biāo)本。 加 20ul 1 N HCI,蓋緊，上下混勻。2－8℃放置 60± 2 分鐘。 加 20ul 1 N NaOH,蓋緊，上下混勻。 即用，或放-20/-70℃保存 3 天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以稀釋倍數(shù) 50。 注意：不同的標(biāo)本 NF-κB p65 （注意： κ 的水平可能有較大差異，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度） 的水平可能有較大差異，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度） 細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿 10 倍稀釋（410ul 的標(biāo)本稀釋液＋50ul 樣本＋20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH）。

大鼠elisa試劑盒加樣：

每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品（已激活）100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置 37℃120 分鐘。 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。 每孔中加入*抗體工作液 100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置 37℃60 分鐘。 洗板：同前。 每孔加酶標(biāo)抗體工作液 100ul。將反應(yīng)板置 37℃30 分鐘。 洗板：同前。 每孔加入底物工作液 100ul，置 37 ℃暗處反應(yīng) 15 分鐘。 每孔加入 100ul 終止液混勻。