從高等植物中提取酶常遇到一些實(shí)際問題，首先是細(xì)胞中含有許多種酶，每種酶的濃度又很低，只占細(xì)胞總蛋白質(zhì)中的極小部分（葉中的雙磷酸核酮糖羧化酶除外），而許多植物組織中蛋白質(zhì)的含量又很低。此外，各種酶的存在狀態(tài)不同，有在細(xì)胞外的外酶，在細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)酶，內(nèi)酶中又有與細(xì)胞器一定結(jié)構(gòu)相結(jié)合的結(jié)合酶，也有的存在于細(xì)胞質(zhì)中，提取時(shí)都應(yīng)區(qū)別對(duì)待，作不同處理。如果酶僅存在于細(xì)胞質(zhì)中，只要將細(xì)胞破碎，酶就會(huì)轉(zhuǎn)移到提取液中；但如果是與細(xì)胞器（如細(xì)胞壁、細(xì)胞核、線粒體、原生質(zhì)膜、微粒體等）緊密結(jié)合的酶，這時(shí)如僅僅破碎細(xì)胞還不夠，還需要用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒚笍倪@些結(jié)構(gòu)上溶解下來。其次，細(xì)胞中存在抑制物質(zhì)，如酚，酸，離子等，它們通常在液泡中，當(dāng)細(xì)胞破碎時(shí)，這些物質(zhì)象蛋白質(zhì)一樣從細(xì)胞中釋放出來，進(jìn)入提取液中，特別是酚類物質(zhì)，具有游離的酚羥基，能與蛋白質(zhì)肽鍵的氧原子形成強(qiáng)的氫鍵，不能為一般的實(shí)驗(yàn)方法，如透析和凝膠過濾所解離。酚易氧化產(chǎn)生醌，醌為一種強(qiáng)氧化劑，會(huì)使蛋白質(zhì)的功能團(tuán)發(fā)生氧化或發(fā)生聚合，使蛋白質(zhì)上的反應(yīng)基團(tuán)，如-SH，-NH2，通過1，4-加成反應(yīng)而發(fā)生不可逆的聚合作用，使酶失活，也使植物組織和提取液產(chǎn)生棕色，以致影響酶活性的測(cè)定。因此如果沒有特殊需要，一般常選用植物的非綠色部分或者黃化的幼苗，在這些組織中一般酚類化合物含量較低。在提取過程中為了盡量減少酚類的影響，一般提取液常選用高pH值的緩沖溶液，因?yàn)樵诟遬H值時(shí)，酚類大部游離而不與蛋白質(zhì)形成強(qiáng)的氫鍵，但高pH值促進(jìn)酚類氧化，同時(shí)降低酚類吸附劑（如PVP）的有效性，通常采用pH6.7梍7.2。已經(jīng)知道PVP能與游離酚羥基形成強(qiáng)的氫鍵復(fù)合物，是酚類化合物的有效結(jié)合劑。在提取線粒體時(shí)加入可溶性PVP，提取可溶性酶時(shí)加入不溶性交聯(lián)PVP（Polyvinyl polypyrrolidone，簡(jiǎn)稱PVPP，或PolyclarAT），能有效地降低提取液中酚的含量。PVPP含有微量金屬元素及PVP單體，可加10%HCl煮沸10分鐘，用NaOH中和，再用水洗幾次，直至中性，純化后的PVPP不必干燥就可直接應(yīng)用。
植物細(xì)胞有堅(jiān)韌的細(xì)胞壁，需要強(qiáng)烈的方法去破碎，少量樣品可用研缽加石英砂研磨，或用玻璃勻漿器。大量樣品則需用電動(dòng)勻漿器。為減低研磨或勻漿過程中發(fā)熱，所用器皿和溶液需要預(yù)冷，提取液的用量一般為組織的1梍5倍，用量大些有利于提高得率，但工作量大，一般寧可用量小些，將殘?jiān)偬崛∫淮?。提取勻漿時(shí)加入酚類結(jié)合劑PVPP，金屬螯合劑Na2-EDTA，以及-SH化合物以保護(hù)蛋白質(zhì)，或加入非離子型去垢劑如TritonXp-100，以增加蛋白質(zhì)的可溶度，常用于與膜脂結(jié)合的酶?？傊梢酝ㄟ^試驗(yàn)以確定提取蛋白質(zhì)的*條件。
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