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回收目的片段的實(shí)驗(yàn)步驟介紹

閱讀：1154發(fā)布時間：2010-11-8

前言：本實(shí)驗(yàn)采用電泳回收法。通過特別的 V 形電泳槽，將挖出的含有目的片段的凝膠置于 V 形槽前，接通電泳電源， DNA 即進(jìn)入 V 形管中，回收 V 形管中溶液即可， 回收的 DNA 片段能保持較高的濃度。

實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 大量酶切產(chǎn)物的電泳分離：瓊脂糖為 0.8 ％，選用大型電泳槽及厚梳子，并載低電壓下電泳以提高分辨率。
2. 紫外燈下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝膠。
3. 把凝膠片置于特制的 V 型槽平臺上，在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 電泳緩沖液（使其剛好淹過膠面），再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ，接通電源進(jìn)行電泳。
4. 紫外燈下檢測凝膠塊是否含有 DNA ，判斷 DNA 是否全部進(jìn)入 V 形管溶液中。
5. 當(dāng) DNA 進(jìn)入 V 形管中，放掉電泳槽中的緩沖液，吸出 V 形管中的溶液。
6. 溶液加兩倍體積的*，混勻，置－ 70 ℃ 兩小時或者－ 20 ℃ 過夜。
7.1200rpm 離心 10 分鐘，沉淀用 70 ％酒精洗一次，風(fēng)干，加入 10ul 與 8ul TE 及 1ul 載樣緩沖液混合，電泳檢查并根據(jù)帶的亮度估算其濃度。
提示：本文目的片段的回收方法屬于DNA實(shí)驗(yàn)文章，主要介紹基因片段方面的知識，內(nèi)容僅供學(xué)習(xí)交流與參考。


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