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瓊脂糖凝膠電泳操作步驟

閱讀：5159發(fā)布時(shí)間：2010-10-28

瓊脂糖凝膠電泳比較法：
若DNA樣品中含RNA或其它雜質(zhì)，凝膠電泳是一種方便而較準(zhǔn)確的定量方法。
1. 取2μlDNA樣品，加0.4μl電泳上樣緩沖液（含溴酚藍(lán)），混勻后加樣于含0.5μg/ml溴乙錠的瓊脂糖微型電泳凝膠的孔格內(nèi)。
2. 取一系列濃度不同的2μl標(biāo)準(zhǔn)DNA樣品（0.5～50μg/ml）0.4μl上樣緩沖液混合上樣。標(biāo)準(zhǔn)DNA溶液中，應(yīng)含有一種與樣品DNA分子量大小相近似的DNA分子。
3. 電泳：使DNA移入瓊脂糖膠內(nèi)。一般為溴酚藍(lán)遷移2cm左右。
4. 將凝膠浸入含0.01mol/L MgCl2的電泳緩沖液中5分鐘，進(jìn)行背景脫色。
5. 在短波紫外線（254nm）下進(jìn)行拍照，比較樣品DNA與DNA的標(biāo)準(zhǔn)品的熒光強(qiáng)度，并計(jì)算出待測(cè)樣品中DNA濃度。
熒光法靈敏快速。但它的熒光強(qiáng)度決定于溴乙錠嵌入堿基中的多少，這與DNA的超螺旋程度密切相關(guān)，標(biāo)準(zhǔn)與樣品難以*一致，并且還受其它影響熒光發(fā)光污染物的影響。
注：本文瓊脂糖凝膠電泳法核酸定量分析屬于分子生物技術(shù)文章，主要介紹核酸、定量分析方面的知識(shí)，內(nèi)容僅供學(xué)習(xí)交流與參考。


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