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質(zhì)粒小提試劑盒常見問題及解答

閱讀:1342發(fā)布時(shí)間:2016-11-10

質(zhì)粒小提試劑盒常見問題及解答
沒有提出質(zhì)粒或者質(zhì)粒濃度很低
a、菌種老化:
建議:對(duì)于甘油保存的菌種,需要*行活化。涂布或者劃線菌種,重新挑選單菌落進(jìn)行液體培養(yǎng),并對(duì)菌種進(jìn)行初搖活化,按照1:500的比例進(jìn)行菌種培養(yǎng)。二次培養(yǎng)細(xì)胞不要超過16小時(shí)。
b、質(zhì)粒丟失
建議:某些質(zhì)粒在多次繼代培養(yǎng)的過程中會(huì)出現(xiàn)丟失的現(xiàn)象,另外檢查篩選抗生素的濃度是否正確。
c、裂解不充分
建議:如果采用超過推薦量的菌體進(jìn)行質(zhì)粒制備,會(huì)導(dǎo)致菌體裂解不充分??蛇m當(dāng)減少菌體的用量或者相應(yīng)增大各種Buffer的用量。請(qǐng)根據(jù)選取的試劑盒,處理相應(yīng)量的細(xì)菌量。
d、Buffer中有沉淀未溶解
建議:Buffer B和Buffer C在溫度較低時(shí)會(huì)出現(xiàn)沉淀,使用前請(qǐng)檢查是否有沉淀生成,如有沉淀生成,請(qǐng)置于37℃溫育片刻,待溶液澄清后使用。
e、DNA Wash Buffer中未按要求加入乙醇
建議:按照說明書要求加入要求量的無水乙醇,使用后旋緊瓶蓋,防止乙醇揮發(fā)。
f、溶解液pH值不正確
建議:將DNA從柱子上溶解下來的zui適pH值在7.0~8.5之間,如果溶解液的pH超出此范圍將會(huì)顯著影響溶解效果,請(qǐng)使用試劑盒配套的Elution Buffer(pH 8.5,10 mM Tris-HCl)進(jìn)行溶解,如果用ddH2O或者其他溶液進(jìn)行溶解,請(qǐng)確保pH在7.0~8.5之間。
g、溶解體積及時(shí)間的選擇
建議:溶解體積將會(huì)影響zui終的收獲量,溶解體積越大,收獲量越高,但是濃度將會(huì)降低。請(qǐng)使用試劑盒推薦的溶解體積進(jìn)行溶解,以保證的收獲量和濃度。如果需要高濃度的質(zhì)粒,請(qǐng)減少溶解體積。另外,如果想收獲高濃度高收獲量的質(zhì)粒,可進(jìn)行二次溶解。
建議:加入Elution Buffer后,室溫放置2~5 min,更有利于溶解。

質(zhì)粒純度不高
a、蛋白質(zhì)污染OD260/ OD280<1.8
建議:選擇推薦量的菌體,離心后小心吸取上清,如果上清液中混有懸浮物,可再次離心,以*去除蛋白質(zhì)。
b、RNA污染OD260/ OD280>2.0
建議:檢查配送的RNase A是否*加入到Buffer A中,加入RNase后,Buffer A/RNase應(yīng)該存放在4℃,如果存放時(shí)間過長,或者沒有正確存放,請(qǐng)重新加入RNase。
c、基因組DNA污染
建議:加入Buffer B后,輕輕顛倒混勻,避免劇烈震蕩渦旋,加入Buffer B的處理時(shí)間不要超過5 min。

注:內(nèi)容供參考,具體產(chǎn)品信息請(qǐng)來電或在線咨詢。
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