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用于免疫測定方法建立的抗原

時間:2011-10-29閱讀:559
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在目前通常所用的免疫測定試劑盒中所用的抗原一般有三大類,即純化抗原、合成抗原和基因工程抗原。

純化抗原系指從人體液、組織或病原體培養(yǎng)物中采用物理化學方法如超速離心、過濾層析、電泳分離等所分離得到的目的抗原,如從HBsAg高滴度攜帶者外周血中分離純化的HBsAg,從胎盤血中分離純化的甲胎蛋白(a-fetoprotein),從HIV培養(yǎng)液中裂解純化的HIV抗原等。純化抗原的共同特點是,其*保留了天然抗原所具備的抗體結合特性,所有的決定簇包括立體構型決定簇都不會受到破壞。但純化抗原的純度對相應的免疫測定方法的特異性有較大影響。

合成抗原一般均是多肽抗原,如HCV和HIV結構和非結構區(qū)的合成多肽抗原,這類抗原因其為多肽片段,缺乏完整抗原所具有的立體構型決定簇,用于相應的抗HCV和抗HIV抗體的檢測有可能導致結合這種立體構型決定簇的抗體漏檢。

基因重組抗原是在已知目的抗原的核苷酸序列的基礎上,采用基因工程技術得到的表達抗原,如乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、梅毒螺旋體、弓形體、巨細胞病毒(CMV)、HCV和HIV的基因重組抗原等。

在目前的商品ELISA試劑盒中基本上都已使用這些重組抗原。由于基因重組抗原通常為病原體的部分抗原,如梅毒螺旋體的TpNl5,TpNl7和TpN47,HCV的核心區(qū)及NS3,NS4和NS5,HIV的gp41和gpl20等,因此,用此類重組抗原建立免疫方法來測定相應抗體,難免在測定相應病原體感染的敏感性上有缺陷。

zui近,美國Chiron公司為改善抗HCV測定的敏感性,將組成HCV的7個功能區(qū)即核心及E1,E2/NSl,NS2,NS3,NS4和NS5區(qū)中的除NS2以外的6個表達成一個融合蛋白“MEFA-6”,以這種融合蛋白建立的免疫測定方法的測定敏感性較使用NS3—NS4—核心(C25)區(qū)融合蛋白的免疫測定方法高2~4倍。

基因重組抗原不但對原抗原的生物學和免疫學特性能zui大程度地保留,而且可工業(yè)化大量生產,同時沒有從生物體液中提純抗原所存在的傳染危險性。
 

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