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ELISA試劑盒操作說明:
1、封板膜只做一次性使用。
2、標本中待測物質(zhì)含量過高時先將樣本稀釋一定倍數(shù)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
3、各步加樣均使用加樣器,并經(jīng)常校對其正確性,一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)。
4、液體標本置4℃保存應(yīng)小于1周,-20℃。
ELISA試劑盒洗板時還應(yīng)注意以下問題:
1、需每天校正注液量及殘液量,洗滌后殘液量不得大于2μl;
2、及時更換破損吸液針,避免破壞底板包被;
3、針對不同廠家酶標板注意調(diào)整吸液頭下降高度,避免沖洗針頭卡住酶標板;
4、注意調(diào)整洗液量,洗液量過多將溢出,過少將達不到洗滌效果;
5、關(guān)機前使用蒸餾水沖洗管道,避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道;
6、不同種試劑盒的洗液嚴禁混合使用。
ELISA試劑盒注意事項:
1.邊緣效應(yīng) 使用96孔板的ELISA測定中,常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)",即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。在實驗室的常規(guī)ELISA測定中,將板從室溫(通常在25℃左右)置于37℃溫箱,板也升溫時,在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時,將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)",并且可提高測定的重復(fù)性。
2.加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以,有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。
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