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原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)基本步驟

閱讀:3805發(fā)布時(shí)間:2012-01-12

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1、器官和組織的選擇
盡可能的去除不必要的組織和血跡。

2、原代細(xì)胞的分離
(1)應(yīng)用PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒I、II、III。
(2)根據(jù)組織來源不同,可選用不同的PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒。

3、原代細(xì)胞的培養(yǎng):
(1)PriCells原代細(xì)胞特制培養(yǎng)基
(2)PriCells原代細(xì)胞特制添加物
(3)胎牛血清

4、細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定:
PriCells原代細(xì)胞鑒定試劑盒

4、原代細(xì)胞的傳代、保存
(1)傳代:依椐細(xì)胞的生長狀態(tài),生長的細(xì)胞1:2或1:3進(jìn)行傳代。
(2)保存:DMSO+培養(yǎng)液+血清
按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃ 過夜)→液氮。

5、原代細(xì)胞的復(fù)蘇
(1)取出細(xì)胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。
(2)吸出細(xì)胞懸液,并加10倍以上培養(yǎng)液。
(3)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶,放入37℃ CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

 


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