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上海酶聯(lián)生物研究所


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酶標(biāo)儀檢測值的計(jì)算和結(jié)果控制

閱讀：4190發(fā)布時(shí)間：2011-12-27

　　光是電磁波，波長100nm-400nm稱為紫外光，400nm-780nm之間的光可被人眼觀察到，大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂樟斯庵械募t色光譜。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。
　　
　　檢測單位
　　
　　光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
　　
　　檢測單位用OD值表示，OD是opticaldelnsity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度，OD=10g（1/trans），其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：
　　
　　E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表示被吸收的光密度，Ⅰ0為在檢測物之前的光強(qiáng)度，Ⅰ為從被檢測物出來的光強(qiáng)度。
　　
　　OD值由下述公式計(jì)算：
　　
　　E=OD=C×D×E
　　
　　其中：C為檢測物的濃度；D為檢測物的厚度；E為摩爾因子。
　　
　　在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長，在此波長下，此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會(huì)造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測定檢測物時(shí)，我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測，稱為測量波長。
　　
　　但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個(gè)參照波長，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長下，檢測物光的吸收zui小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
　　
　　Anthos酶標(biāo)儀檢測值計(jì)算
　　
　　儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào)，zui大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為0%，沒有檢測物的透光值為100%。則實(shí)際檢測中，檢測物的透光值均在0%一100%之間。
　　
　　透光值的計(jì)算如下：
　　
　　T=（Meas-Min）/（Max-Min）
　　
　　其中T為透光值，Meas為檢測的二進(jìn)位數(shù)值，Min為在0%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，Max為在100%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：
　　
　　Anthos酶標(biāo)儀的中心定位
　　
　　儀器會(huì)自動(dòng)對酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。在對每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測時(shí)，儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測量，選取zui中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
　　
　　光源的參照通道
　　
　　參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。
　　
　　酶標(biāo)儀的用途和其它提示
　　
　　用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室，包括臨床實(shí)驗(yàn)室。
　　
　　質(zhì)量控制
　　
　　質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　
　　空白校正
　　
　　有一些試劑盒的說陰書將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的，請按照試劑盒的說明書要求進(jìn)行。
　　
　　檢測結(jié)果的解釋
　　
　　由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測試劑的體積，都會(huì)造成OD值的不，因此，只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進(jìn)行。

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