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行業(yè)產(chǎn)品

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上海酶聯(lián)生物研究所


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技術(shù)文章

相對定量和定量的區(qū)別

閱讀：523發(fā)布時(shí)間：2011-12-21

　　定量的目的是測定目的基因在樣本中的分子數(shù)目，即通常所說的拷貝數(shù)。相對定量的目的是測定目的基因在兩個(gè)或多個(gè)樣本中的含量的相對比例，而不需要知道它們在每個(gè)樣本中的拷貝數(shù)。舉例來說，如果研究項(xiàng)目中包括處理過的和未經(jīng)處理的對照樣本，通?？梢詫⑽唇?jīng)處理的樣本為基準(zhǔn)，規(guī)定其目的基因濃度為 100%，將經(jīng)處理的樣本的定量結(jié)果除以對照樣品的定量結(jié)果，就可以計(jì)算各個(gè)處理樣本的基因含量相對于未處理樣品的百分比。
　　定量實(shí)驗(yàn)必須使用已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品，必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線。相對定量可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可以不做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　相對定量實(shí)驗(yàn)有兩種方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法和CT值比較法。如果使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，可以使用標(biāo)準(zhǔn)品，也可以使用相對標(biāo)準(zhǔn)品，而且相對標(biāo)準(zhǔn)品在實(shí)驗(yàn)操作上更為簡便易行。相對標(biāo)準(zhǔn)品是只知道樣品中DNA或RNA的稀釋比例而不需要知道其分子數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)品，典型的做法是將一個(gè)已知pg數(shù)的樣品做一系列梯度稀釋。
　　CT值比較法是利用CT值與起始DNA濃度的對數(shù)成反比的數(shù)學(xué)關(guān)系，來計(jì)算不同樣本之間的相對百分比，定量的數(shù)據(jù)易于理解，但是標(biāo)準(zhǔn)品的制備和測定其DNA含量比較困難。有許多商業(yè)性的標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒供選購，可以解決這種困難。相對定量的標(biāo)準(zhǔn)品容易在實(shí)驗(yàn)室里自己制備，但是數(shù)據(jù)處理比較麻煩，對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的解釋有一定難度。


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