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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：342發(fā)布時(shí)間：2011-10-12
可溶性抗原，如蛋白質(zhì)、多糖、類(lèi)脂質(zhì)和病毒等，與相應(yīng)抗體結(jié)合后，抗原抗體復(fù)合物可以結(jié)合補(bǔ)體，但這一反應(yīng)肉眼不能察覺(jué)，如再加入紅細(xì)胞和溶血素，即可根據(jù)是否出現(xiàn)溶血反應(yīng)來(lái)判定反應(yīng)系統(tǒng)中是否存在相應(yīng)的抗原或抗體。這個(gè)反應(yīng)就是補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)是一種古老的血清學(xué)技術(shù)，Bordet和Gengou在1901年設(shè)計(jì)這一試驗(yàn)，由于有敏感性高和適應(yīng)性廣的優(yōu)點(diǎn)，盡管操作繁雜，目前仍被有效地應(yīng)用。
1、補(bǔ)體及其作用特點(diǎn)
補(bǔ)體存在于哺乳動(dòng)物血清中，各種動(dòng)物比較，豚鼠血清中補(bǔ)體含量zui高，成分較全，效價(jià)穩(wěn)定，采取方便，故通常將豚鼠的全血清作為補(bǔ)體。56℃30min可使補(bǔ)體失去活性，稱(chēng)為%26ldquo;滅能%26rdquo;或%26ldquo;非動(dòng)%26rdquo;。
補(bǔ)體的作用為能與抗原%26mdash;抗體復(fù)合物結(jié)合，但不能與抗原單獨(dú)結(jié)合，也不易與抗體單獨(dú)結(jié)合；補(bǔ)體的作用沒(méi)有特異性，能與任何一組抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。它能與紅細(xì)胞（抗原）和溶血素（抗體）的復(fù)合物結(jié)合，引起紅細(xì)胞破壞（溶血），也能與細(xì)菌、病毒成分及其相應(yīng)抗體的復(fù)合物結(jié)合。
2、溶血反應(yīng)
將紅細(xì)胞多次注射于動(dòng)物（如將綿羊紅細(xì)胞多次免疫家兔）可使之產(chǎn)生相應(yīng)的抗體（溶血素），這種抗體與紅細(xì)胞結(jié)合，若有補(bǔ)體存在時(shí)，則紅細(xì)胞被溶解，這種現(xiàn)象稱(chēng)為溶血反應(yīng)。紅細(xì)胞和溶血素被稱(chēng)為溶血系統(tǒng)，常在補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中用作測(cè)定有無(wú)補(bǔ)體游離存在的指示劑。
3、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)及其原理
可溶性抗原，如蛋白質(zhì)、多糖、類(lèi)脂、病毒等或者顆粒性抗原，與相應(yīng)抗體結(jié)合后，其抗原抗體復(fù)合物可以結(jié)合補(bǔ)體，但這一反應(yīng)肉眼不能覺(jué)察。如再加入紅細(xì)胞和溶血素，即可根據(jù)是否出現(xiàn)溶血反應(yīng)來(lái)判定反應(yīng)系統(tǒng)中是否存在相對(duì)應(yīng)的抗原和抗體。此反應(yīng)即為補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中的抗體主要是IgG和IgM。反應(yīng)的原理在于補(bǔ)體本身沒(méi)有特異性，能與任何抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。以檢查鼻疽病為例，先向試管中加入已知的抗原（鼻疽菌的浸出液），再加入被檢馬匹的血清（抗體）和豚鼠血清（補(bǔ)體），這三種成分稱(chēng)為反應(yīng)系統(tǒng)或溶菌系統(tǒng)。如果該馬是鼻疽病馬，則血清中有抗鼻疽桿菌的抗體?？乖涂贵w發(fā)生結(jié)合，吸附補(bǔ)體。如果該馬沒(méi)有鼻疽病，血清中沒(méi)有抗鼻疽菌的抗體，則不能形成抗原抗體復(fù)合物，不能吸附補(bǔ)體，則補(bǔ)體游離存在。
由于許多抗原是非細(xì)胞性的，而且上述抗原、抗體和補(bǔ)體三種成分都是用生理鹽水或緩沖鹽水稀釋的比較透明的液體，所以補(bǔ)體不論是否被結(jié)合，都不能直接看到，故無(wú)法判定。因此，在反應(yīng)系統(tǒng)的三種成分作用一定時(shí)間之后，再向其中添加指示系統(tǒng)%26mdash;綿羊紅細(xì)胞和特異性抗體溶血素。如果抗原和病馬血清中抗體特異性結(jié)合，吸附補(bǔ)體，沒(méi)有游離補(bǔ)體存在，加入指示系統(tǒng)，因無(wú)補(bǔ)體參加，不發(fā)生溶血，這種情況稱(chēng)為補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)陽(yáng)性，即該馬患有鼻疽??；反之，則該馬未患鼻疽病。
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)操作繁雜，且需十分細(xì)致，反應(yīng)的各個(gè)因子的量必須有恰當(dāng)?shù)谋壤?。特別是補(bǔ)體和溶血素的用量。補(bǔ)體的用量必須恰如其分，例如：抗原抗體呈特異性結(jié)合，吸附補(bǔ)體，本應(yīng)不溶血，但因補(bǔ)體過(guò)多，多余部分轉(zhuǎn)向溶血系統(tǒng)，發(fā)生溶血現(xiàn)象。又如抗原抗體為非特異性，抗原抗體不結(jié)合，不吸附補(bǔ)體，補(bǔ)體轉(zhuǎn)向溶血系統(tǒng)，應(yīng)*溶血，但由于補(bǔ)體過(guò)少，不能全溶，影響結(jié)果判定。故補(bǔ)體量必須恰如其分。溶血素量也有一定影響，例如陰性血清，應(yīng)*溶血，但溶血素量少，溶血不全，可被誤認(rèn)為弱陽(yáng)性。另外，這些因子的用量又與其活性有關(guān)：活性強(qiáng)，用量少；活性弱，用量多，故在本試驗(yàn)之前，必須測(cè)定溶血素效價(jià)、溶血系統(tǒng)補(bǔ)體價(jià)、溶菌系統(tǒng)補(bǔ)體價(jià)等，測(cè)定其活性以確定用量。
4、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的應(yīng)用
補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)是診斷人、畜傳染病常用的血清學(xué)診斷方法之一。本法不僅可用于診斷傳染病，如鼻疽、牛肺疫、馬傳染性貧血、乙型腦炎、布氏桿菌病、鉤端螺旋體病、血錐蟲(chóng)病等，也可用于鑒定病原體，如對(duì)馬流行性乙型腦炎病毒的鑒定和口蹄疫病毒的定型等。
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