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特異性抗體免疫磁珠分選、分離、純化原代細(xì)胞

閱讀:903發(fā)布時(shí)間:2011-8-12

特異性抗體免疫磁珠分選、分離、純化原代細(xì)胞
用包被特異性抗體或抗IgG抗體的免疫磁珠分選、分離、純化原代細(xì)胞的方法。
可以在幾分鐘內(nèi)從復(fù)雜的原代細(xì)胞混合物中分離出很高純度的目的原代細(xì)胞。
用包被特異性抗體或抗IgG抗體可以分離出非常純的原代細(xì)胞群體,而且有*的回收率和存活率。依據(jù)細(xì)胞頻率和標(biāo)記表達(dá)水平的不同,原代細(xì)胞的純度可達(dá)95%-99.9%。 ?
基本原理:
已包被用包被特異性抗體磁珠與原代細(xì)胞表面相應(yīng)分子特異性結(jié)合,或者抗IgG抗體磁珠與預(yù)先已與細(xì)胞表面分子特異結(jié)合的特異性抗體結(jié)合。磁珠攜帶與之結(jié)合的細(xì)胞吸附于分離柱/試管上,實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞分離或陰性細(xì)胞分離。
基本分類:
免疫磁珠法分為陽(yáng)性細(xì)胞分離法和陰性細(xì)胞法:
陽(yáng)性細(xì)胞分離法-磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞。
陰性細(xì)胞分離法-磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞,游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞。
一般而言,陰性細(xì)胞分離法比陽(yáng)性細(xì)胞分離法的磁珠用量大。
基本步驟:
1、離心收集待分離細(xì)胞,用少量E孵育液(0.5%A、0.08%EDTA PH7.2 ,真空抽濾除菌及液體內(nèi)氣體)充分混懸細(xì)胞(0.5ml/1×108細(xì)胞),包被特異性抗體磁珠或抗IgG抗體,4°C孵育30分鐘。

2、用20倍體積E洗細(xì)胞一次,再加E(0.3ml/1×108細(xì)胞)充分混懸細(xì)胞后,加入相應(yīng)二抗包被的超微磁珠,混勻后置8~15°C孵育10~15分鐘。
3、將分離柱安裝入磁場(chǎng)中,加入0.5ml E,在重力作用下自然流盡,以預(yù)處理分離柱。
建議:
1、分離細(xì)胞全過(guò)程在超凈臺(tái)中完成。
2、超微磁珠及微小磁場(chǎng)系統(tǒng)適合于106-107細(xì)胞分離。
3、分離柱一般只能一次應(yīng)用。
4、盡量去除死細(xì)胞。
5、細(xì)胞懸液加入分離柱中時(shí),應(yīng)將滴管伸至底壁后加入,避免將細(xì)胞懸液沿管壁流入。


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