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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：3474發(fā)布時間：2010-10-14
使用多價展示還是單價展示的選擇與載體類型的選擇有關(guān)。帶有噬菌體正常啟動子的普通噬菌體載體一般會形成多價展示，除非被展示蛋白被大量酶解。另外，用于其中的噬菌粒載體通常仍然會是多價展示的，因此pⅧ展示的約2700個拷貝中只有一小部分是融合蛋白。另一方面，使用能在一個弱（或非誘導(dǎo)性）啟動子的調(diào)控下將蛋白展示在pⅢ蛋白上的噬菌粒載體上，通常會導(dǎo)致被稱為“單價展示”的結(jié)果。
了解單價展示的本質(zhì)是很重要的。從含有pⅢ噬菌粒展示載體的并用輔助噬菌體感染過的大腸桿菌中制備噬菌體顆粒，一個典型的制備產(chǎn)物會出現(xiàn)呈泊松分布的融合蛋白的表達(dá)：10％或更少的顆粒會展示一個拷貝的融合蛋白；展示兩個拷貝的比例則非常??；而剩下的大部分顆粒只會展示野生型的pⅢ蛋白。所以，大部分展示性種類是單價的，但大部分顆粒*五展示。
由于對區(qū)別具有不同親和性的結(jié)合物能力的影響，展示的價位是zui重要的。早期工作顯示，多價展示會無法鑒定出篩選中親和性zui高的克隆，因為多價位會使弱結(jié)合性克隆具有高表觀親和性（親和力）。單價展示可以保證基于單純親和性的篩選，因而一毀被用于很多以從文庫中鑒定出結(jié)合zui緊密的變異體為目的的研究。反過來，在一些初始候選者的結(jié)合性非常低的應(yīng)用中（如與一個給定靶標(biāo)結(jié)合的多肽的從頭篩選），多價位增加了分離出的及弱結(jié)合性的克隆的機(jī)會。在這樣的項目中，一個常用的實驗策略就是以多價展示開始，然后當(dāng)被展示多肽的親和性成熟時，轉(zhuǎn)為單價展示。
大量用于噬菌粒制備的不同輔助噬菌體已經(jīng)被開發(fā)出來，并可以從商業(yè)途徑得到。一般而言，它們可以被交替使用。它們?nèi)欢己心芙档桶b效率的突變（以確保噬菌?；蚪M被優(yōu)先包裝），以及含有能保證對細(xì)菌（含有帶Ff復(fù)制起始位點的噬菌粒）進(jìn)行有效感染的突變M13K07及其衍生物VCSMl3帶有*抗性基因，使得對被輔助噬菌體感染過的細(xì)菌抗生素的篩選得以進(jìn)行。
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