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公司動態(tài)

gⅥ-cDNA噬菌粒文庫小規(guī)模的獲取和純化

閱讀:729發(fā)布時(shí)間:2010-7-26

[器材和試劑]
●通用設(shè)備及試劑以及以下的設(shè)備和試劑:
●無菌96孔帶蓋培養(yǎng)板(Costar)
●LBAT
●R408輔助噬菌體(Stratagene)
●振蕩孵育箱
●96孔復(fù)制板
●PEG/NaCl(
●PBS

[方法]
1.將克隆體接種到100ul LBAT 96孔培養(yǎng)板上,并在37℃過夜振蕩培養(yǎng)(180r/min)。
2.使用96孔復(fù)制板將其接種到裝有200ul LBAT的第二塊96孔培養(yǎng)板上,在37℃培養(yǎng)直到生長中期(大約1,5小時(shí))。
3.在每一孔中加入10ul 2×1011TU/mlR408輔助噬菌體。
4.37℃無振蕩培養(yǎng)30分鐘。
5.37℃過夜振蕩培養(yǎng)。
6.4℃800g離心20分鐘,收集細(xì)胞。
7.將上清液轉(zhuǎn)移到一新的96孔培養(yǎng)板上,并加40pul PEG/NaCl。
8.將板放置于冰上1小時(shí)。
9.4℃800g離心20分鐘,收集噬菌體顆粒,小心除去上清液,在50ulPBS溶液中打散顆粒。

 


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