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瘋牛病IDEXXEIA檢測方法

閱讀:332發(fā)布時(shí)間:2011-7-6

本方法(IDEXX HerdChek BSE EIA test)由美國IDEXX公司開發(fā)研制,是一種快速簡捷的酶聯(lián)免疫測定方法,2004年通過美國和歐盟認(rèn)證。

該方法的原理是將牛腦組織制成勻漿懸液,用稀釋液處理組織懸液,將處理后的腦組織懸液加入到包被有能選擇性地捕獲PrPSc的化學(xué)聚合物(英國Microsens公司技術(shù))的微孔板中,室溫孵育,洗滌后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的針對PrP分子保守區(qū)的單抗,TMB顯色,測定OD值,判斷結(jié)果。

本方法的敏感性為100%,特異性為99.99%。本方法的特點(diǎn)在于不需要蛋白酶K消化,無需離心,無需特別溫度的孵育,所有步驟都在室溫下進(jìn)行,4.5h內(nèi)出結(jié)果,無需豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)廢物少,所需實(shí)驗(yàn)空間小。

瘋牛病的IDEXXEIA檢測方法主要步驟如下。

(1)樣品準(zhǔn)備 收集樣品(腦閂部組織),勻漿,用稀釋液稀釋勻漿液。

(2)捕獲PrPSc將稀釋好的勻漿液加入到BSE病原捕獲板中,由seprion親和配體捕獲。

(3)添加調(diào)節(jié)緩沖液 洗去捕獲板中未結(jié)合的樣品,加入調(diào)節(jié)緩沖液并孵育,使捕獲的PrPSc變性,以便充分暴露抗原位點(diǎn)。

(4)添加HRP標(biāo)記的單抗 洗去調(diào)節(jié)緩沖液,加入HRP標(biāo)記的單抗并孵育。標(biāo)記了HRP的PrP單抗結(jié)合上PrPSc。

(5)添加底物和終止液 洗去未結(jié)合的單抗,加入底物并孵育。當(dāng)有陽性時(shí)出現(xiàn)藍(lán)色,滴加HCl終止液終止反應(yīng),顏色則變成了黃色。

(6)讀值和分析 用酶標(biāo)儀讀板,數(shù)值用IDEXXxChek軟件分析。
 


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