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技術(shù)文章

現(xiàn)場或牧區(qū)大群檢疫布氏桿菌病的免疫學方法

閱讀:904發(fā)布時間:2011-5-25

1.虎紅平板凝集試驗(RBT)

虎紅平板凝集試驗是血清凝集試驗(SAT)中較常用的一種方法。我國于1980年開始應用,目前應用廣泛。其抗原為虎紅染色抗原。將每份血清樣品取25~30uL放在白搪瓷板、塑料板或WHO血凝反應板上,在每份血清滴的旁邊加等量抗原,在zui后一滴抗原加上以后立即混合血清和抗原,使其形成直徑約2cra的區(qū)域,室溫下輕微搖晃4min,凡出現(xiàn)可見凝集反應者均判為陽性,反之判為陰性。
RBT試驗敏感,然而,與其他血清學試驗一樣,由于S19疫苗免疫或假陽性反應(FPSR)而出現(xiàn)陽性結(jié)果。假陰性反應較少發(fā)生(主要是因為前帶反應),對血清樣品進行稀釋或一定時間后重復檢測可消除這種反應。RBT試驗可以作為感染畜群的篩查實驗,陽性反應應用合適的確證體系進行復查(包括其他試驗檢驗和流行病學調(diào)查)。

2.緩沖布氏桿菌平板凝集試驗(BPAT)

取血清80ul與30ul的抗原在玻板上標出的4cm×4cm的范圍內(nèi)混合均勻,接著將板傾斜旋轉(zhuǎn)3次,以使二者均勻散開,然后將板置常溫下(20~25℃)濕盒內(nèi)孵育4min。再取出如前述旋轉(zhuǎn)3次再孵育4min。取出玻板,邊轉(zhuǎn)邊觀察凝集情況。任何可見的凝集均判為陽性。與虎紅平板凝集試驗一樣,此法也很敏感,尤其是對免疫過的動物。陽性樣品需用驗證實驗進行復查。假陰性的出現(xiàn)通常是由于前帶反應,通過對血清進行稀釋或一定時間后復查可消除這種影響。

3.布氏桿菌病全榛紛詞匝?

抗原由獸醫(yī)生物藥廠供應。受檢乳樣須為新鮮的全乳,采乳樣時應將母畜的乳房用溫水洗凈、擦干,然后將乳液擠入潔凈的器皿中,采集的乳樣夏季時應于當日內(nèi)檢查,保存于2℃時,7天內(nèi)可使用。取乳樣lml,加于滅菌凝集試驗管內(nèi),然后取充分振蕩混合均勻的全乳環(huán)狀抗原1滴(約50pL)加入乳樣中充分混勻。置37-38℃水浴中60min,加溫后取出試管勿使之振蕩,立即進行判定。按乳脂和乳柱的顏色進行判定,脂肪較少或無脂肪的牛乳呈陽性反應時,菌體呈凝集現(xiàn)象下沉管底,判定時以乳柱的反應為準。

 


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