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技術(shù)文章

豬繁殖與呼吸綜合征病毒分離

閱讀:738發(fā)布時間:2011-4-6

目前用于分離PRRSV的細(xì)胞主要有如下幾種:豬原代肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)、CL2621細(xì)胞、MARC445(MA—104細(xì)胞系的克?。?。zui近又從MARC—145中克隆出更敏感的HS2H細(xì)胞用于PRRSV的分離。通常先將感染豬及流產(chǎn)、死產(chǎn)胎兒的肺及其淋巴結(jié)、肝、腎等組織勻漿,接種原代PAM或傳代細(xì)胞系(如CL2621、MARCl45、HS2H等細(xì)胞),經(jīng)傳代后出現(xiàn)特異性CPE者,表明病毒分離陽性。研究發(fā)現(xiàn),不同的病毒株適合生長在不同的細(xì)胞上,有的毒株僅生長在一種細(xì)胞上,有些則生長在多種細(xì)胞上,但大多數(shù)毒株均適應(yīng)PAM,但用PAM所需成本高且難度較大(Wensvoort,et al,1991)。

PAM對PRRSV具有較高的敏感性,大多數(shù)毒株均可適應(yīng)于該細(xì)胞,并且產(chǎn)毒量高。PAM可采用氣管灌入法獲得,用健康豬或SPF豬制備肺泡巨噬細(xì)胞。盡管可從許多組織當(dāng)中分離到PRRSV,但血清和肺組織成功率zui高,尤其是血清采樣較方便,因感染12~24h,便可在感染豬的血液中發(fā)現(xiàn)較高滴度的PRRSV,仔豬可持續(xù)8周,并且抗體有促進(jìn)PRRSV在PAM中復(fù)制的作用(Yoon,et a1,1996;Kim,et a1,1993;Choi,et a1,1992)。但應(yīng)用PAM會存在一些不足之處,豬肺存在未知微生物的污染,特別是支原體等病原微生物;較難獲得均質(zhì)的PAM,從而影響結(jié)果的可靠性;試驗(yàn)動物費(fèi)用昂貴;制備PAM的技術(shù)難度大,因此應(yīng)用受到一定的限制(Kim,etal,1993)。

從MAl04(猴腎細(xì)胞)中克隆出的MAR~145細(xì)胞對PRRSV具有高度的敏感性,可供多種毒株分離,其zui高病毒滴度達(dá)108.5TCID50/0.1lml,接種后48h出現(xiàn)明顯的CPE變化,72h后細(xì)胞皺縮,脫落,接種4—5天后CPE發(fā)展迅速,80%一100%細(xì)胞產(chǎn)生CPC變化(Kim,etal,1993)。

在進(jìn)行病毒分離的同時,還應(yīng)結(jié)合相應(yīng)的IFA和IPMA等方法進(jìn)行檢測,從而使結(jié)果更可靠(Wensvoort,etal,1991;Kim,et a1,1993;Baustista,et a1,1993a)。
 


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