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化學發(fā)光酶免疫測定

閱讀:473發(fā)布時間:2011-1-8

化學發(fā)光免疫測定(chemiluminesent immunoassay,CLIA)是免疫測定技術繼酶免技術(EIA)、放免技術(RIA)、熒光免疫技術(FIA)和時間分辨熒光免疫技術(TRFIA)之后發(fā)展的一項新興測定技術。其
基本原理是將化學發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應相結合,以檢測樣本中的抗原或抗體,由于它既具有免疫反應的高度特異性,又具有發(fā)光反應的高敏感性,且對環(huán)境公害小,因此近年來已被國內外臨床實驗室及科研單位,廣泛應用于各種激素、特種蛋白及藥物的監(jiān)測和分析。

化學發(fā)光分析技術根據其標記物的不同可大致分為3大類:化學發(fā)光酶免疫測定、化學發(fā)光標記免疫測定、電化學發(fā)光免疫測定。

化學發(fā)光酶免疫測定(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)從標記物性質來看應屬酶免疫測定。CLEIA測定中的兩次抗原抗體反應步驟均與酶免疫測定相同,僅zui后一步酶反應所用的底物為發(fā)光劑而非顯色劑。CLEIA中常用的兩種標記酶是HRP和ALP,其原理如下。

(一)HRP標記的CLEIA
HRP標記的CLEIA常用的底物為魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行,通常以pH8.6的0.1mol/LTrig緩沖液作底物液,當HRP與魯米諾在堿性環(huán)境下發(fā)生氧化反應時,魯米諾將能量轉移并zui終以發(fā)射光子的形式釋放,而光的強度與被測物的濃度成正比;此外,HRP催化魯米諾氧化的反應可被某些酚試劑(如鄰碘酚)或螢火蟲熒光素酶等加強。加強劑的作用是增強發(fā)光和延長發(fā)光時間,由此可提高檢測的敏感度。

(二)ALP標記的CLEIA
在以ALP為標記酶的CLEIA中,應用的底物一般為adamantyl dioxetase phosphate及其衍生物如PPD等。當ALP與底物相互作用時,ALP使底物由能量基態(tài)轉變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),當非穩(wěn)態(tài)的底物以光子形式將能量轉移,并回到基態(tài)時,其發(fā)光的強度則與被測物的濃度成正比,因此測定反應產物的發(fā)光強度即可獲得被測物的濃度。

 


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