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小鼠神經(jīng)干細(xì)胞細(xì)胞說明書

2011-11-23  閱讀(2659)

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長期以來,中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病一直是困擾人類健康的一大難題。1992年,Reynodls
1等從成年小鼠腦紋狀體中分離出能在體外不斷分裂增殖,且具有多種分化潛能的細(xì)胞群,并正式提出了神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells, NSCs)的概念,從而打破了認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞不能再生的傳統(tǒng)理論。NSCs的發(fā)現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷疾病的治療及其傷后功能重建帶來了曙光。1997MckayNSCs的概念總結(jié)為:具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力,能自我更新并可以提供大量腦組織細(xì)胞2。隨NSCs在醫(yī)學(xué)和研究領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸增多,利用穩(wěn)定的 NSCs細(xì)胞株,可以為關(guān)于 NSCs的深入研究包括細(xì)胞的活動、正常與非正常狀態(tài)等,以及體外構(gòu)建神經(jīng)組織代謝性疾病和腦組織損傷的藥物篩選模型,提供可靠的細(xì)胞資源,同時(shí)為研究工作節(jié)約寶貴的時(shí)間和培養(yǎng)費(fèi)用。
本公司培養(yǎng)出品的取自 SPF級的孕齡 14天的 ICR小鼠(*軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心,許可證號:SCXK-(軍)2007-004)胚胎大腦的 SVZ區(qū),用 DFR03神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基(貨號: M1024)進(jìn)行原代培養(yǎng)。傳代擴(kuò)增至第二代凍存(DIV15),每支含 1×106個細(xì)胞。細(xì)胞經(jīng)檢測,鏡下成球形生長(如1所示);單克隆實(shí)驗(yàn)及 Brdu染色證明其具備良好的增殖能力(如圖 2,3所示);免疫熒光化學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,該細(xì)胞能表達(dá) NSCs的標(biāo)志性蛋白 nestin(如圖 4所示);5%胎牛血清誘導(dǎo)可分化稱為神經(jīng)元(neuron)、星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte)(如圖 5所示)。品名:ICR小鼠神經(jīng)干細(xì)胞貨號:C3016規(guī)格:1×106cells/管產(chǎn)品特性:
1.    SPF級的孕齡 14天的 ICR小鼠胚胎大腦的 SVZ區(qū)
2.    在特定的已知成分的無血清培養(yǎng)基可自我更新,倍增時(shí)間小于 48小時(shí)。
3.    在體外具有多分化潛能
 
4.穩(wěn)定的正常二倍體細(xì)胞。質(zhì)量控制:本產(chǎn)品經(jīng)過了細(xì)菌、真菌、霉菌、支原體檢測。運(yùn)輸與保存:
本品使用 10%DMSO凍存液冷凍,采用干冰保存運(yùn)輸,收到細(xì)胞后,如果不立即復(fù)蘇,請將細(xì)胞放入液氮中保存待用。切勿置于室溫下,以免造成 DMSO損傷。細(xì)胞復(fù)蘇方法:
取出凍存管后,投入 37℃水浴中,震蕩解凍,酒精消毒管壁外側(cè)后,將其轉(zhuǎn)入超凈臺中,將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中,加入 5mlDFR03神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基, 1000轉(zhuǎn),離心 5分鐘,棄去上清,在加入 5mlDFR03神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。產(chǎn)品承諾:
實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果表明,本株 ICR小鼠 SVZ來源的 NSCs體外增殖 10代后,仍能夠保持神經(jīng)干細(xì)胞良好的特性。建議使用本公司配套的培養(yǎng)基和正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代,以此保證細(xì)胞具備良好的增殖和分化能力。使用:
本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用,不可應(yīng)用于臨床。附圖(供參考)
1.體外培養(yǎng) 15天( DIV15),第二代 NSCs在培養(yǎng)基中懸浮成球生長圖 2在 1%膠原水凝膠中 NSCs由單個細(xì)胞形成克隆球
3.BrdU熒光染色
4.原代 NSCsnestin染色陽性
5.NSCs誘導(dǎo)分化得到的神經(jīng)元(β -tubulin III陽性 ,綠色)和星形膠質(zhì)細(xì)胞( GFAP陽性,紅色)
參考文獻(xiàn)
1Reynolds BA, Weiss S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science,1992, 255(5052):1707-1710.
2McKay R. Stem cells in the central nervous system. Science, 1997,276(5309):66

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