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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司專業(yè)經(jīng)營(yíng)生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品，致力于向國(guó)內(nèi)生命科學(xué)研究人員提供*的產(chǎn)品和服務(wù)。 我們代理和經(jīng)銷的分子生物學(xué)試劑、生化試劑、免疫試劑、細(xì)胞培養(yǎng)試劑、制藥工業(yè)原料、實(shí)驗(yàn)儀器與消耗品、臨床診斷產(chǎn)品等，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)基礎(chǔ)與開(kāi)發(fā)研究、制藥、疾病診斷、人口與健康、生物技術(shù)等諸多領(lǐng)域。我們的客戶遍布大學(xué)、研究所、醫(yī)院、制藥公司、生物技術(shù)公司和工業(yè)等單位。
1. 收到細(xì)胞株包裹時(shí)， 請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形， 若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開(kāi)始培養(yǎng)， 或立即冷凍保存（置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2）。
細(xì)胞復(fù)蘇的原則－快速融化：
必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。
具體操作
一. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過(guò)毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
二．取出凍存管：
1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。
2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
三．迅速解凍：
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
四.平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
五.制備細(xì)胞懸液：
1.吸棄上清液。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。
六.細(xì)胞計(jì)數(shù)：細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
七.培養(yǎng)細(xì)胞將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)（或者24-48小時(shí)）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定
